層析技術

    層析法是利用不同物質理化性質的差異而建立起來的技術,。所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成：一是固定相；另一是流動相,。當待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時,，由于各組分的理化性質存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附,、溶解,、結合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同,，而且隨溶媒向前移動,，各組分不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用力越弱的組分,，隨流動相移動時受到的阻滯作用小,，向前移動的速度快。反之,，與固定想相互作用越強的組分,，向前移動的速度越慢。分部收集流出液,，可得到樣品中所含的各單一組分,，從而達到將各組分分離的目的。

層析系統(tǒng)的必要組分有：

（1）,、固定相,。固定相是層析的一個基質。它可以是固體物質（如吸附劑,、凝膠,，離子交換劑等），也可以是液體物質（如固定在硅膠或纖維素上的溶液）,，這些基質能與待分離的化合物進行可逆的吸附,、溶解，交換等作用,。它對層析的效果起著關鍵的作用,?？梢允且环N固體、凝膠或固定化的液體,，由某種支持基質所支撐,。

（2）、層析床,。把固定相填入一個玻璃或金屬柱中,，或者薄薄涂布一層于玻璃或塑料片上或者吸附在醋酸纖維紙上。

（3）,、流動相,。在層析過程中，推動固定相上待分離的物質朝著一個方向移動的液體,、氣體或超臨界體等,，都稱為流動相。柱層析中一般稱為洗脫劑,，薄層層析時稱為展層劑,。它也是層析分離中的重要影響因素之一。

（4）,、運送系統(tǒng),。用來促使流動相通過層析床。

（5）,、檢測系統(tǒng),。用于檢測試管中的物質。

層析根據(jù)不同的標準可以分為多種類型：

1. 根據(jù)固定相基質的形式分類,。層析可以分為紙層析,、薄層層析和柱層析。紙層析是指以濾紙作為基質的層析,。柱層析則是指將基質填裝在管中形成柱形,，在柱中進行層析。紙層析和薄層層析主要適用于小分子物質的快速檢測分析和少量分離制備,，通常為一次性使用,，而柱層析是常用的層析形成。適用于樣品分析,、分離,。生物化學中常用的凝膠層析、離子交換層析,、親和層析,、液相色譜等都通常采用柱層析形式。
2. 根據(jù)流動相的形式分類。層析可以分為液相層析和氣相層析,。氣相層析是指流動相為氣體的層析,，而液相層析指流動相為液體的層析。氣相層析測定樣品時需要氣化,，大大限制了其在生化領域的應用,，主要用于氨基酸、核酸,、糖類,、脂肪酸等小分子的分析鑒定；而液相層析是生物領域zui常用的層析形成,，適于生物樣品的分析,、分離。
3. 根據(jù)分離的原理不同分類,。層析主要可以分為吸附層析,、分配層析、凝膠過濾層析,、離子交換層析,、親和層析等,。

    吸附層析：是以吸附劑為固定相,，根據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達到分離目的的一種層析技術。

    分配層析：是根據(jù)在一個有兩相同時存在的溶劑系統(tǒng)中,，不同物質的分配系數(shù)不同而達到分離目的的一種層析技術,。

   凝膠過濾層析：是以具有網(wǎng)狀結構的凝膠顆粒作為固定相，根據(jù)物質的分子大小進行分離的一種,。

   離子交換層析：是以離子交換劑為固定相,，根據(jù)物質的帶電性質不同而進行分離的一種。

   親和層析：是根據(jù)生物大分子和配體之間的特異性親和力（如酶和仰制劑,、抗體和抗原,、激素和受體等），將某種配體鏈接在載體上作為固定相,，而對能與配體特異性結合的生物大分子進行分離的一種,。親和層析是分離生物大分子zui為有效的，具有很高分辨率,。