層析技術(shù)

    層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù),。所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成：一是固定相；另一是流動相,。當(dāng)待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時,，由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附,、溶解,、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同,，而且隨溶媒向前移動,，各組分不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用力越弱的組分,，隨流動相移動時受到的阻滯作用小,，向前移動的速度快。反之,，與固定想相互作用越強的組分,，向前移動的速度越慢,。分部收集流出液,，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達到將各組分分離的目的,。

層析系統(tǒng)的必要組分有：

（1）,、固定相。固定相是層析的一個基質(zhì),。它可以是固體物質(zhì)（如吸附劑,、凝膠，離子交換劑等）,，也可以是液體物質(zhì)（如固定在硅膠或纖維素上的溶液）,，這些基質(zhì)能與待分離的化合物進行可逆的吸附、溶解,，交換等作用,。它對層析的效果起著關(guān)鍵的作用?？梢允且环N固體,、凝膠或固定化的液體，由某種支持基質(zhì)所支撐,。

（2）,、層析床,。把固定相填入一個玻璃或金屬柱中，或者薄薄涂布一層于玻璃或塑料片上或者吸附在醋酸纖維紙上,。

（3）,、流動相。在層析過程中,，推動固定相上待分離的物質(zhì)朝著一個方向移動的液體,、氣體或超臨界體等，都稱為流動相,。柱層析中一般稱為洗脫劑,，薄層層析時稱為展層劑。它也是層析分離中的重要影響因素之一,。

（4）,、運送系統(tǒng)。用來促使流動相通過層析床,。

（5）,、檢測系統(tǒng)。用于檢測試管中的物質(zhì),。

層析根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)可以分為多種類型：

1. 根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類,。層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析,。紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析,。柱層析則是指將基質(zhì)填裝在管中形成柱形，在柱中進行層析,。紙層析和薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測分析和少量分離制備,，通常為一次性使用，而柱層析是常用的層析形成,。適用于樣品分析,、分離。生物化學(xué)中常用的凝膠層析,、離子交換層析,、親和層析、液相色譜等都通常采用柱層析形式,。
2. 根據(jù)流動相的形式分類,。層析可以分為液相層析和氣相層析。氣相層析是指流動相為氣體的層析,，而液相層析指流動相為液體的層析,。氣相層析測定樣品時需要氣化，大大限制了其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用，主要用于氨基酸,、核酸,、糖類、脂肪酸等小分子的分析鑒定,；而液相層析是生物領(lǐng)域zui常用的層析形成,，適于生物樣品的分析、分離,。
3. 根據(jù)分離的原理不同分類,。層析主要可以分為吸附層析、分配層析,、凝膠過濾層析,、離子交換層析、親和層析等,。

    吸附層析：是以吸附劑為固定相,，根據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達到分離目的的一種層析技術(shù)。

    分配層析：是根據(jù)在一個有兩相同時存在的溶劑系統(tǒng)中,，不同物質(zhì)的分配系數(shù)不同而達到分離目的的一種層析技術(shù),。

   凝膠過濾層析：是以具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠顆粒作為固定相，根據(jù)物質(zhì)的分子大小進行分離的一種,。

   離子交換層析：是以離子交換劑為固定相,，根據(jù)物質(zhì)的帶電性質(zhì)不同而進行分離的一種。

   親和層析：是根據(jù)生物大分子和配體之間的特異性親和力（如酶和仰制劑,、抗體和抗原,、激素和受體等），將某種配體鏈接在載體上作為固定相,，而對能與配體特異性結(jié)合的生物大分子進行分離的一種,。親和層析是分離生物大分子zui為有效的,，具有很高分辨率,。