豬ELISA試劑盒在正式試驗時,有許多事項需特別注意,,首先應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性,。有時本底較高,,說明有非特異性反應,可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。其次在
豬ELISA試劑盒中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,,其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
豬ELISA試劑盒將抗體或抗原吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0-9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4度18-24小時。即用不同的蛋白質濃度進行包被后,,在其它試驗條件相同時,,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1-10μg每毫升,。固定其它條件或采取“方陣法”在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。豬ELISA試劑盒對供氫體的選擇要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反應,,而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,,應注意防護,。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入,。