苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase,，PAL）試劑盒                            分光光度法  50管/48樣

注意：正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

PAL（EC4.  3 1  5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的

關(guān)鍵酶,，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素,、異黃酮類植保素,、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，

在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用,。

測定原理

PAL催化  L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,，反式肉桂酸在 290nm處有zui大吸收值，

通過測定吸光值升高速率計算 PAL活性,。

所需的儀器和用品

紫外分光光度計,、水浴鍋、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、1  mL石英比色皿、研缽,、冰

和蒸餾水,。

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存,。

試劑一：液體 40mL×1瓶,，4℃保存。

試劑二：粉劑×3 瓶,，4℃保存,。臨用前每瓶加入 4mL  蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存,；

試劑三：液體 2.5mL×1瓶,，4℃保存。

粗酶液提取

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL

提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

測定步驟

混勻,，靜置10min后，290nm處記錄測定管吸光值A(chǔ)1和對照管吸光值A(chǔ)2,，△A=A1-A2,。

注意：對照管只要做一管

PAL活性計算

（1）按蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶

活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每mL反應(yīng)體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶活性單位,。

PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積,，1.04mL；V樣：加入樣本體積,，0.02mL,；V樣總：加入提取液

體積,，1 mL；T：反應(yīng)時間,，30 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；