抗壞血酸（Vc）測試盒說明書

一、試劑盒組成及配置（50T/48樣)

   試劑一,；貯備液5mlx1瓶,，4℃保存6個月。

         試劑一應(yīng)用液配制：用時按照試劑一貯備液：雙蒸水=1:14稀釋,，混

         勻制備,。 

   試劑二：粉劑x1支，4℃保存6個月,。

         試劑二應(yīng)用液配制：用時一支粉劑加0.36ml冰醋酸再加水至40ml,，

         溶解，4℃保存,。

   試劑三：白色結(jié)晶體粉劑x1支,，4℃保存6個月。

         試劑三應(yīng)用液配制：因膠南溶解,，用前2-4小時加95%乙醇或無水乙

         醇60ml充分溶解,，制備，4℃保存,。

   試劑四：黃色貯備液0.2mlx1瓶,，冰箱4-8℃避光保存，貯存時間6個月,。

         試劑四應(yīng)用液配制:用時取0.15ml試劑貯備液加水至25ml制備,。（先

         用現(xiàn)配）

   試劑五：液體6mlx1瓶，4℃保存6個月,。

   試劑六：Vc標準品：粉劑6mgx3支,，每瓶內(nèi)含維生素C，4℃保存6個月,。

        60ug/ml Vc標準品應(yīng)用液的配制：將1支標準品粉劑溶于10ml試劑一

        應(yīng)用液中,，制備。

        6ug/ml Vc標準品應(yīng)用的配制：取60ug/ml Vc標準品應(yīng)用液再用試劑

        一應(yīng)用液10倍稀釋備用,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

注：維生素C標準品易氧化，因此,，在樣本上清液制備好后在配標準,，并在10分鐘內(nèi)進行檢測。

二,、操作過程：

   1,、上清液制備：取樣本0.15ml加1號試劑0.45ml，旋渦混勻,，放置15分

      鐘后離心,，3500～4000轉(zhuǎn)/分,，離心10分鐘，上層清亮液體為上清液,。

   2,、  上清液中Vc的測定：

混勻放置10分鐘,，1cm或者0.5cm光徑,，雙蒸水凋零，536nm處測各管的OD值,。

三,、計算公式：

1、血清（漿）的計算與舉例：

①,、計算公式：

②,、計算舉例：

例1：    取許晴0.15ml，按操作表操作,，測得空白管OD為0.031,，標準管OD為0.184，測定管為OD為0.144,，則計算結(jié)果為：

2：組織的計算與舉例：

①,、計算公式：

②、計算舉例：

例1:    取 10%大鼠肝勻漿0.15ml,，按操作表操作,，測得空白管OD為0.032，標準管OD為0.184,，測定管為OD為0.146,，同時測得10%大鼠肝勻漿蛋白濃度為8.5mgprot/ml。

則計算結(jié)果為：

例2：   取20%輪蟲勻漿0.15ml,，按操作表操作,，測得空白管OD為0.031，標準管為OD為0.186,，測定管為0.177,，同時測得20%輪蟲勻漿蛋白濃度為0.8537mgprot/ml。則計算結(jié)果為：

四,、測定原理：

    本法對Fe與還原性抗壞血酸迅速作用生成Fe,，后者在于菲羅啉顯色反應(yīng)，可以測定血漿中維生素C的含量,。

五,、測定的意義：

維生素C在體內(nèi)參與膠原物質(zhì)合成，是脯氨酸羥化酶和賴氨酸羥化酶的輔因子，是催化多巴胺轉(zhuǎn)變成去甲腎上腺的銅酶多巴β羥化酶所必需,，當維生素C缺乏時,，合成的膠原得不到充分的強化，不能很好的形成纖維

維生素Czui明顯的化學(xué)活性是作為還原劑,，他可以將Fe還原成Fe,，促使鐵在腸道吸收，促進鐵的貯存和利用,。

抗壞血酸作為自由基清除劑，可以很快地與O,反應(yīng),，更快地與反應(yīng)生成抗壞血酸自由基,，它也可以清楚O，因此,，抗壞血酸可以保護機體免受內(nèi)源性氧自由基的損傷,。

維生素C能與α-生育酚自由基花怒按成維生素E，間接的騎著鏈阻斷劑作用,。

維生素C是血漿中有效的抗氧化劑,，是細胞外液抗氧化防御系統(tǒng)的*道防線，Vc對血漿中正在進行著脂質(zhì)過氧化作用也有阻斷作用,。