免疫技術用熒光染料

    在流式細胞計的應用中,，熒光色素是關鍵試劑，免疫熒光的檢測,，對試劑的要求尤其具有特殊性,。

     對熒光染料的要求1、染料必須在理想的激光光源的某一波長有強烈吸收,；2,、由于免疫熒光測定，信號的強度是主要限制因素,，故要求染料應有較高的量子效應3,、激發(fā)光和發(fā)射光之間要有較大的波長區(qū)別，以便使熒光能與激發(fā)光源所造成的背景區(qū)別開來4,、便于同抗體和其他蛋白偶聯(lián)，又不影響其熒光及抗體的特異性,。

熒光染料  常見者見表,。其中FITC已為國內免疫界通用，此外不做介紹,。當前國內常用的商品化的染料類是藻膽蛋白（Ohycobili protein）是來自光合青色細菌（photosyntheric  cyanobacteria）和紅色藻類（Red algae）的自然熒光色素,。其基本類型為：藻紅蛋白（Phycoerythrin，PE）、藻青蛋白（Phycocyanin）及別藻青蛋白（Allophycocyanin,，APC),其分子結構基本是幾個帶有開鏈四吡咯色基因的多肽混合物,，很適合標記抗體，它們有以下特點：可以在廣泛的波長下有效地激發(fā),；每個分子都帶有許多產生高激發(fā)系數的發(fā)光色基團,；激發(fā)光、發(fā)射光易鑒別（Stokes位移大）,；易溶于水,，發(fā)出的熒光不受pH影響，因而不易受生物因素影響而淬滅,。這類熒光色素的代表是藻紅蛋白,。目前，盡管應用者較多,，但其標記困難及結合物易形成素脫落,，保存時間短等缺點，也影響其推廣,，人們正在尋找新的熒光染料,。為了測定細胞表面的多種標記，還應考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求,；1,、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯(lián)，該色素可被單波長光激發(fā),，并能通過特殊的發(fā)射光區(qū)別開,；或用不同激發(fā)波長來激發(fā)，發(fā)射光可通過光譜的差異,、特殊發(fā)射光或發(fā)射時間不同來區(qū)別,。2、結合抗體的色素不干擾抗體反應的特異性,，或同一實驗中其他色素的特性,。3、適用一步,、二步,、三步染色法，加適當對照組能克服試劑間的干擾,。

    為了測定細胞表面的多種標記,，還應考慮免疫熒光染料反光源和這些顏料的相互配合的要求；1,、兩種以上抗體同兩種以上色素交聯(lián),，該色素可被單波長光激發(fā)，并能通過特殊的發(fā)射光區(qū)別開；或用不同激發(fā)波長來激發(fā),，發(fā)射光可通過光譜的差異,、特殊發(fā)射光或發(fā)射時間不同來區(qū)別。2,、結合抗體的色素不干擾抗體反應的特異性,，或同一實驗中其他色素的特性。3,、適用一步,、二步、三步染色法,，加適當對照組能克服試劑間的干擾,。