產(chǎn)品簡介：

過氧化氫酶(Catalase，CAT)又稱觸酶,，是一類以鐵卟啉為輔基的結(jié)合酶,，由四個相同亞單位組成的四聚體酶，共含4分子的亞鐵血紅素作為輔基,，分子量約為24KD,，CAT能將細(xì)胞代謝產(chǎn)生的毒性物質(zhì)過氧化氫迅速清除，可與 GSH-Px 共同保護巰基酶,、膜蛋白,、過氧化氫解離。

自備材料：
1,、蒸餾水,、生理鹽水
2、研缽或勻漿器,、離心管,、離心機、水浴鍋或恒溫箱,、酶標(biāo)儀,、96 孔板
操作步驟(僅供參考)： 
1、配制65mM H2O2基液：本試劑盒提供的 H2O2 基液中的H2O2濃度約為1M,，由于過氧化氫不是非常穩(wěn)定,，使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度，把濃度約為1M的H2O2基液用本CAT Assay Buffer稀釋100倍,，使H2O2基液中的 H2O2 濃度約為10mM,；分光光度計測定A240(一般情況下新配制的10mM H2O2 基液A240在0.4~0.45左右，經(jīng)過3個月以后A240 在0.35~0.4 左右),，H2O2濃度(mM)=22.94×A240,，進(jìn)而計算出本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2的實際濃度，然后再根據(jù)實際的過氧化氫濃度,， 配制65mMH2O2基液,。
2、配置MO顯色液：稱取0.4g鉬酸銨試劑加入到 10ml 蒸餾水中,，充分溶解即成,，MO顯色液易出現(xiàn)乳白色樣物質(zhì)，應(yīng)棄用,，盡量現(xiàn)用現(xiàn)配,，該試劑盒提供的鉬酸銨試劑為過量。 

3,、準(zhǔn)備樣品：
①細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解,，可以采用 RIPA裂解液，如有必要可進(jìn)行適當(dāng)勻漿,，低速離心取上清,，-20℃凍存，用于CAT的檢測,。
②血漿,、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備,，用生理鹽水10倍稀釋后,，可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接測定,，不能及時檢測可-20℃凍存,。
③全血樣品：收集適量的全血至一抗凝管內(nèi)，顛倒混勻,，取全血凍融一次,，用CAT Assay Buffer 1000倍后進(jìn)行CAT檢測。
④血液中的紅細(xì)胞裂解液：用抗凝管收集血液,，顛倒混勻,，取至少 500μl 全血 4℃ 3000g 離心 5min,，棄上清，沉淀用預(yù)冷的生理鹽水洗滌3次,，用約5倍細(xì)胞體積的預(yù)冷的去離子水,，例如 Milli-Q 純水，重懸細(xì)胞沉淀,，冰浴 10min,；使用前用 CAT Assay Buffer 稀釋400倍后進(jìn)行CAT檢測。
⑤植物樣品：準(zhǔn)確稱取植物材料(果肉或者去葉脈的葉片)0.5g,，剪碎,，置于4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器中，加入預(yù)冷提取液 1ml,，低溫研磨至勻漿后轉(zhuǎn)移至離心管,，用3ml 提取液沖洗研缽或勻漿器并轉(zhuǎn)入離心管，加提取液至總體積為 5ml,；4℃ 10000r/min 離心20min,，上清液為酶提取液，上清液可用于CAT的檢測,。提取液配方：無水磷酸氫二鈉
3.3g+二水磷酸二氫鈉 0.13g,，補水至 200ml，溶解即為提取液,，4℃保存?zhèn)溆?。注意：如?CAT 酶活性較低，應(yīng)相應(yīng)減少提取液的總體積,，以便提高CAT 酶的濃度,。
⑥高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的CAT，可以使用CAT Assay Buffer 稀釋,。
⑦(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,，以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的CAT含量。 

注意事項：

1,、 該試劑盒亦可用分光光度計進(jìn)行測定,，但檢測的樣本數(shù)相應(yīng)減少。
2,、 待測樣品中不應(yīng)含有CAT抑制劑,，同時需避免反復(fù)凍融。
3,、 CAT Assay Buffer 如果出現(xiàn)渾濁或絮狀物,，應(yīng)棄用。
4,、 MO顯色液配置后可4℃穩(wěn)定兩周,，如果出現(xiàn)乳白色物質(zhì)應(yīng)棄用,，最好現(xiàn)用現(xiàn)配。
5,、 對于植物樣品研磨處理應(yīng)迅速,，以免CAT酶活下降,，同時盡量置于冰浴狀態(tài)處理,；另外本法不推薦用于植物樣本CAT的檢測，最好采用過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒(紫外比色法),。
6,、 完整的紅細(xì)胞以及未稀釋的溶血液中的過氧化氫酶置于4℃ 1周仍然較穩(wěn)定，稀釋后的溶血液中CAT容易失活,。
7,、 盡量避免冰凍樣品造成溶血，否則過氧化氫酶活性會下降10~15%,。
8,、 血清樣品室溫下3天內(nèi)活性下降 64.7%，4℃條件下下降 10.5%,，-20℃保存30天活性僅下降3.5%,，因此待測樣品均應(yīng)-20℃或-70℃保存。

9,、 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

10,、試劑開封后請盡快使用,，以防影響后續(xù)實驗效果。

有效期：12 個月有效,；低溫運輸,，按要求保存。