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當(dāng)前位置:青島捷世康生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>酸溶血定性檢測試劑盒說明書
產(chǎn)品簡介:
紅細(xì)胞(Red blood cell,,RBC)也稱紅血球,,是血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞,脊椎動物體內(nèi)通過RBC運(yùn)送氧氣,RBC同時還具有免疫功能,。在貧血檢查中可通過蔗糖水溶血試驗(yàn)來檢測紅細(xì)胞膜的缺陷,,尤其適用于檢測陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(paroxysmalnocturnal hemoglobinuria,PNH),該癥為獲得性紅細(xì)胞膜缺陷引起的慢性血管內(nèi)溶血,,常在睡眠時加重,,可伴發(fā)性血紅蛋白尿和全血細(xì)胞減少。
酸溶血定性檢測試劑盒是利用PNH紅細(xì)胞對補(bǔ)體敏感性增高,,在酸化的血清中經(jīng)過37℃孵育,,易溶血,血清經(jīng)過56℃加熱30min,,使補(bǔ)體滅活,,病人紅細(xì)胞不溶解,該試劑盒主要用于檢測人,、動物血液的紅細(xì)胞膜的缺陷,,尤其用于鑒定陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,,不適用于臨床診斷或其他用途,。
自備材料:
1、生理鹽水
2,、與患者同血型的正常新鮮血液
3,、水浴鍋
操作步驟(僅供參考):
1、制備脫纖維血清:取患者和與患者同血型的正常人靜脈血 5ml,,慢慢注入含有3個潔凈玻璃珠的小容器中,,立即輕輕的持續(xù)搖動,直至纖維蛋白出現(xiàn)并附著于玻璃珠上為止(一 般需要 10~15min),。轉(zhuǎn)移脫纖維血至潔凈離心管,,低速離心,取上清待用,,即為脫纖維血清,。
2、制備50%紅細(xì)胞懸液:取脫纖維血清,,經(jīng)生理鹽水洗滌3次,,每次都應(yīng)顛倒、混勻,、離心,,盡量吸棄上清液,留下紅細(xì)胞沉淀,,加入等體積 PNH NaCl Buffer 重新懸浮紅細(xì)
胞,,即為50%紅細(xì)胞懸液,。
3、取試管6支,,按下表先加入同血型正常人新鮮血清0.5ml,,其中 3、6兩支試管在 56℃
水浴30min,,使補(bǔ)體滅活,,其余4管置于室溫 30min。此后按下表順序操作,。
加入物(ml) | 待測管 | 對照管 | ||||
試管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
正常人新鮮血清 | 0.5 | 0.5 | — | 0.5 | 0.5 | — |
正常人 56℃滅活血清 | — | — | 0.5 | — | — | 0.5 |
Acidic Buffer | — | 0.05 | 0.05 | — | 0.05 | 0.05 |
50%患者紅細(xì)胞懸液 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | — | — | — |
50%正常人紅細(xì)胞懸液 | — | — | — | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
混勻,,置于 37℃水浴中 1h(30min 時輕輕混勻一次),離心,。 | ||||||
陽性結(jié)果(溶血) | ± | 3+ | — | — | — | — |
注意:如果PNH 患者第3管(加正常人滅活血清管)溶血,,則說明此溶血不依賴于補(bǔ)體,故不是PNH,,可能是紅細(xì)胞有其他缺陷(如球形紅細(xì)胞增多癥),,應(yīng)做進(jìn)一步鑒別。
參考區(qū)間:正常人無溶血,。
注意事項:
1,、 所用器具必須潔凈干燥,,以免溶血造成假陰性,。
2、 血清酸化后應(yīng)注意密閉保存,,盡快檢測,,避免CO2逸出導(dǎo)致血清酸度降低,影響溶血程度,。
3,、 如果患者多次輸血,其血液中的不正常細(xì)胞會相應(yīng)減少,,可呈弱陽性或陰性,。出現(xiàn)這種情況應(yīng)延長孵育時間至 4~6h,再觀察溶血情況,。
4,、 該實(shí)驗(yàn)可作為PNH的過篩實(shí)驗(yàn),陰性可排除 PNH,,陽性應(yīng)做酸化溶血實(shí)驗(yàn)證實(shí),。
有效期:6個月有效。
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