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當(dāng)前位置:青島捷世康生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>果膠酶(PG)檢測試劑盒(DNS比色法)產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介:
天然果膠類物質(zhì)以原果膠、果膠(Pectin),、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實(shí),、根,、莖、葉中,,是細(xì)胞壁的一種組成成分,,它們伴隨纖維素而存在,構(gòu)成相鄰細(xì)胞中間層粘結(jié)物,,使植物組織細(xì)胞緊緊黏結(jié)在一起,。果膠酶(Pectinase)是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱,實(shí)質(zhì)是多聚半乳糖醛酸水解酶,,包括原果膠酶,,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,,廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中,,主要用于食品、釀酒,、環(huán)保,、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè),。
果膠酶(PG)檢測試劑盒(DNS 比色法)檢測原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸,,與二硝基水楊酸(DNS)反應(yīng)形成有色化合物,該化合物呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸濃度成正比,,于分光光度計(jì) 540nm 處測定吸光度,,通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中果膠酶活性,主要用于定量檢測植物組織或果實(shí)中果膠酶,,反應(yīng)顏色越深,,吸光度越大,果膠酶的活性越強(qiáng),。該試盒僅用于科研領(lǐng)域,,不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料:
1,、蒸餾水
2、實(shí)驗(yàn)材料:桃子,、李子,、蘋果、杏等果實(shí)或其他植物組織
3,、電子天平,、水果刀或剪刀、研缽或勻漿器,、離心管或試管,、離心機(jī),、水浴鍋
4、比色杯,、分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考):
1,、果膠酶提取:取果實(shí)或其他植物組織,,洗凈,,擦干,稱取剪碎的新鮮樣品 3g,,置于提前 4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器,,加入 3ml 4℃預(yù)冷的 Pectinase Lysis Buffer,充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入離心管或試管,,4℃ 10000g 離心 10min,,留取上清液,即為果膠酶提取液,,4℃保存待用,。
2、稀釋半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)液:取適量的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml),,按下表進(jìn)行稀釋:
加入物(單位:μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
Pectinase Lysis Buffer | 80 | 60 | 40 | 20 | 0 |
半乳糖醛酸濃度(μg/ml) | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 |
3,、加樣:按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管,、對(duì)照管,、測定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,,并注意避免產(chǎn)生氣泡,,小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過高,,可以減少樣品用量或適 當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,,樣品的檢測最好能設(shè)置 2 平行管,求平均值,。
加入物(單位:ml) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對(duì)照管 | 測定管 |
Pectinase Lysis Buffer | 0.3 | — | — | — |
半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號(hào)管) | — | 0.3 | — | — |
果膠酶提取液 | — | — | 0.2(提前煮沸 5min) | 0.2 |
Pectinase Assay Buffer | — | — | 0.1 | 0.1 |
— | 37℃水浴 1h,。 | |||
DNS 顯色液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
4、測定:沸水浴 5min,,自來水中將離心管或試管冷卻至室溫,,以蒸餾水稀釋至 2.4ml, 混勻,,比色杯光徑 1cm,,以空白管調(diào)零,以分光光度計(jì)立即系列標(biāo)準(zhǔn)管,、對(duì)照管,、測定管在 540nm 處吸光度,。
注意事項(xiàng):
1、 取樣量,、試劑用量應(yīng)根據(jù)果膠含量適當(dāng)調(diào)整,。
2、 可溶性糖對(duì)測定結(jié)果有較大影響,,應(yīng)去除樣品中的可溶性糖,。
3、 Pectinase Lysis Buffer 應(yīng)密閉保存,,避免有效成分揮發(fā),。
4、 37℃水浴 1h 后,,應(yīng)立即加入 DNS 顯色液,。
5、 為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
有效期:6 個(gè)月有效;低溫運(yùn)輸,,按要求保存,。
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