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當(dāng)前位置:青島捷世康生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)說明書
產(chǎn)品簡介:
斐林試劑(Fehling's Reagent)又稱菲林試劑或裴林試劑,是德國化學(xué)家Hermann von Fehling 1849年所發(fā)明,,與班氏試劑(Benedict's Reagent)相似,,均是用來檢測還原糖的存在,其原理是與可溶性的還原性糖(葡萄糖,、果糖和麥芽糖)在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀,。
斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)是根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)(食品中還原糖的測定)推薦的直接滴定的方法,,主要由酒石酸鈉鉀、硫酸銅,、亞甲藍(lán),、亞鐵氰鉀等組成,本產(chǎn)品的成分,、原理和用途與斐林試劑(Fehling's Reagent)稍有區(qū)別,。斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)主要用于含淀粉食品、酒飲料,、碳酸飲料,、肉制品、蜜餞等食品中還原糖的定量檢測,;總糖的含量也可以測定,,但需要提前水解后才能檢測,也可用于還原糖的定性試驗(yàn),,該方法的檢測原理是試樣經(jīng)去蛋白處理后以亞甲藍(lán)為指示劑,,在加熱條件下滴定標(biāo)定過的斐林試劑(A液與B液等量混合生成的可溶性藍(lán)色的酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物,,也稱作堿性酒石酸銅溶液),樣品中的還原糖將酒石酸鉀鈉銅中的二價(jià)銅還原成紅色的氧化亞銅沉淀,,氧化亞銅沉淀又與亞鐵氰鉀反應(yīng)生成可溶性的無色絡(luò)合物,,當(dāng)二價(jià)銅全部被還原,稍過量的還原糖把亞甲藍(lán)還原,,溶液就由藍(lán)色變?yōu)闊o色,,即為滴定終點(diǎn),根據(jù)樣品液的消耗體積計(jì)算還原糖含量,;本產(chǎn)品未經(jīng)標(biāo)定,,需客戶自行標(biāo)定。該試劑僅適用于科研領(lǐng)域,,不適用于臨床診斷或其他用途,。
自備材料:
1、試管,、錐形瓶,、容量瓶、玻璃珠
2,、水浴鍋,、酒精燈等加熱裝置
3、葡萄糖,、果糖,、轉(zhuǎn)化糖等還原糖標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)
4、50%鹽酸水溶液,、氫氧化鈉溶液
5,、乙酸鋅溶液、亞鐵氰鉀溶液
6,、分析天平,、酸式滴定管
操作步驟(僅供參考):
1、Fehling's Reagent 的標(biāo)定:
25ml的酸式滴定管中加入還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml)約15ml,,向 150ml錐形瓶中依次加入 Fehling's Reagent A 液和B液各 5ml,,再向其中加入 10ml水和 2~4 粒玻璃珠,加熱錐形瓶,,控制時(shí)間在 2min 內(nèi)沸騰,,保持沸騰以每 2 秒 1滴的速度滴加還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液, 直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn),,記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積,,平行操作3次,取平均值,, 計(jì)算每 10ml Fehling's Reagent(A,、B 液各 5ml)相當(dāng)于還原糖的質(zhì)量(mg),。
2、試樣準(zhǔn)備:
1)含淀粉食品:稱取粉碎或混勻后的試樣 10~20g(精確到 0.001g)置于 250ml 容量瓶中,, 加水 200ml,45℃水浴中加熱 1h,,并時(shí)時(shí)振搖,冷卻后加水至刻度,,混勻,,靜置,沉淀,, 吸取 200.00ml 上清液置于另一 250ml 容量瓶中,,緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰鉀溶液各 5ml,加水至刻度,,混勻靜置 30min,,用干燥濾紙過去,棄去初濾液,,后續(xù)濾液備用,。
2)酒飲料:稱取混勻后的試樣 100g(精確到 0.01g)置于蒸發(fā)皿上,用氫氧化鈉溶液中和至中性,,在水浴上蒸發(fā)至原體積的 1/4 后移入 250ml 容量瓶中,,緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各 5ml,加水至刻度,,混勻靜置 30min,,用干燥濾紙過去,棄去初濾液,, 后續(xù)濾液備用,。
3)碳酸飲料:稱取混勻后的試樣 100g(精確到 0.01g)置于蒸發(fā)皿上,在水浴上微微攪拌除去二氧化碳后移入 250ml 容量瓶中,,用水洗滌蒸發(fā)皿,并入容量瓶,,加水至刻度,,混勻后備用。
4)其他食品:稱取粉碎后的固體試樣 2.5~5g(精確到 0.001g)或混勻后的液體試樣 5~25g
(精確到 0.001g)置于 250ml 容量瓶中,,加水 50ml,,緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰鉀溶液各 5ml,加水至刻度,,混勻靜置 30min,,用干燥濾紙過去,棄去初濾液,,后續(xù)濾液備用,。
3,、試樣溶液預(yù)測:
25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約15ml, 向 150ml 錐形瓶中依次加入 Fehling's Reagent A 液和 B 液各 5ml,再向其中加入 10ml 水和 2~4 粒玻璃珠,,加熱錐形瓶,,控制時(shí)間在 2min 內(nèi)沸騰,保持沸騰以先快后慢的速度滴加試樣溶液,,待溶液顏色變淺時(shí)以每 2 秒 1 滴的速度滴加,,直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn),記錄消耗試樣溶液的總體積,。(注:試樣溶液中還原糖濃度過高時(shí),,應(yīng)適當(dāng)稀釋后再行測定;盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標(biāo)定斐林試劑所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近,,約10ml,;當(dāng)濃度過低時(shí)可直接加入 10ml試樣溶液,不再加10ml水,,再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn),,記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖體積之差相當(dāng)于10ml樣液中所含還原糖的質(zhì)量。)
4,、試樣溶液測定:
25ml 的酸式滴定管中加入試樣溶液約 20ml,,向 150ml 錐形瓶依次加入Fehling's Reagent A 液和 B 液各 5ml,再向其中加入 10ml 水和 2~4 粒玻璃珠,,加熱錐形瓶,,控制時(shí)間在 2min內(nèi)沸騰,保持沸騰以每 2 秒 1 滴的速度滴加試樣溶液,,直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn),,記錄消耗試樣溶液的總體積,平行操作3次,,取平均值,。
1、試樣溶液中還原糖濃度過高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋后再行測定,,盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標(biāo)定斐林試劑所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近,。
2、試樣溶液中還原糖濃度過低時(shí),,直接加入10ml試樣溶液,,不再加10ml水,再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn),,記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖體積之差相當(dāng)于10ml樣液中所含還原糖的質(zhì)量,。
3、也可按上述方法標(biāo)定 4~20ml 斐林試劑(A,、B 液各半)來適應(yīng)試樣中還原糖濃度的變化,。
4,、斐林試劑的 A、B 液須分開儲(chǔ)存,,臨用前按要求混合使用,。
5、斐林試劑B液呈強(qiáng)堿性,,需小心操作,,B液含有,可消除氧化亞銅沉淀對滴定終點(diǎn)的干擾,。
6,、該試劑適用于各類食品中還原糖的測定,但在分析醬油等深色樣品時(shí)會(huì)受色素干擾,,滴定終點(diǎn)模糊不清,,影響準(zhǔn)確性。
7,、為了您的安全和健康,,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:6 個(gè)月有效,。
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