【產(chǎn)品名稱】

通用名：豬藍(lán)耳病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus （ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒,、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）（又稱豬藍(lán)耳病毒）引起的以成年豬生殖障礙,、早產(chǎn),、流產(chǎn)、死胎,，以仔豬呼吸異常為特征的傳染病,。本病是一種免疫抑制病，常繼發(fā)其他病原感染,，病死率比較高,。

本試劑用于檢測豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體，可用于豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫效果評價,。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被豬藍(lán)耳病毒重組蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清,、血漿樣本中豬藍(lán)耳病毒抗體,。實(shí)驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬藍(lán)耳病毒抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液,，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬藍(lán)耳病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存,，有效期12個月,。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮,。使用期限為2個月,。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,，混勻）,。陰、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加350ul工作洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，最后一次拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值,，無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值),。

【參考值】 實(shí)驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,，陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6,。

【檢驗結(jié)果的判定】

1.樣品的OD值即ODS；

2.閾值計算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）,；

SP值≥0.2,，結(jié)果判定為陽性；SP值＜0.2,，結(jié)果判定為陰性,。

3.本實(shí)驗結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測豬血清,、血漿中藍(lán)耳病毒抗體，根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng),、中,、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實(shí)驗操作時需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實(shí)驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以充分溶解,。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

8.不同批號試劑組分不得混用。