注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。 測定意義：

哺乳動物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase）,，廣泛分布于組織和器官,，屬于絲氨酸水解酶家

族。CarE 催化含酯鍵,、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,，但不能催化水解乙酰

膽堿及其類似物。CarE 參與脂質(zhì)運輸和代謝,，并且與多種藥物,、環(huán)境毒物以及致癌物的解

毒和代謝有關(guān)，有機磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE 活性,。

測定原理：

CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,，固籃顯色；在450 nm 光吸收增加速率,，計算CarE 活性,。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板,、低溫離心機,、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和

蒸餾水,。

試劑組成和配置：

試劑一：液體×1 瓶,，4℃保存。

試劑二：液體15mL×2 瓶,， 4℃保存,；

試劑三：粉劑×2 支,， 4℃保存，臨用前取1 支試劑三,，加0.6ml 無水乙醇充分溶解,；

試劑四：粉劑×2 支，-20℃保存,，臨用前取1 支試劑四,，加少量試劑二溶解；

工作液配制：臨用前配制,，向1 瓶試劑二中,，加入溶解后的試劑三和試劑四各1 支，充分溶

解,，過濾,，4℃避光保存，可用1 周,。

粗酶液提?。?/span>

細菌、細胞樣品制備

收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照每200 萬細菌或細胞加入400μL 試劑一，

超聲波破碎細菌或細胞（功率20％,，超聲3s,，間隔10s，重復30 次 ）,；12000g 4℃離心30min,，

取上清液待測。

2,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織,，

加入1mL 試劑一）進行冰浴勻漿；12000g 4℃離心30min,，取上清液待測,。

3、液體：直接測定

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min,，調(diào)節(jié)波長到450 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30 min,。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板,，依次加入5μL 蒸餾水和200μL 試劑二，迅速混勻,，

于450nm 處測定3min 內(nèi)吸光值變化,，第10s 吸光值記為A1,，第190s 吸光值記為A2。△A

空白管=A2-A1

4. 測定管：取微量玻璃比色皿/96 孔板,，依次加入5μL 上清液和200μL 試劑二,，迅速混勻，

于450nm 處測定3min 內(nèi)吸光值變化,，第10s 吸光值記為A3,，第190s 吸光值記為A4。△A

測定管=A4-A3

注意：空白管只需測定一次,。

CarE 活性計算公式：

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1 組織中CarE 活性

（1） 按蛋白濃度計算

CarE 活性單位定義：每 mg 組織蛋白在 37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加 1 定義為 1

個酶活單位。

CarE 酶活(U/mg prot)= (△A 測定管-△A 空白管) ×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T

= 13.67×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

CarE 活性單位定義：每g 組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1 定義為1 個酶活

單位,。

CarE 酶活(U/g 鮮重)= (△A 測定管-△A 空白管) ×V 反總×（V 樣總÷V 樣）÷W÷T

=13.67×(△A 測定管-△ A 空白管)÷W

2 細菌或細胞中CarE 活性

CarE 活性單位定義：每1 萬個細菌或細胞在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1 定義

為一個CarE 活性單位,。

CarE 酶活(U/10⁴ cell)= (△A 測定管-△A 空白管) ×V 反總×（V 樣總÷V 樣）÷細胞密度（10⁴

cell/mL）÷T=13.67×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞密度（10⁴ cell/mL）

3. 液體中CarE 活性

CarE 活性單位定義：每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1 定義為1 個酶

活單位。

CarE 酶活(U/mL )= (△A 測定管-△A 空白管) ×V 反總÷V 樣÷T

=13.67×(△A 測定管-△A 空白管)

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，205μL=2.05×10^-4L,；V 樣總：上清液總體積，1 mL,；V 樣：加入

上清液體積(mL),，0.005 mL；Cpr：蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣品質(zhì)量（g）；T：反應(yīng)時間

（min）,，3min,。

b. 使用96 孔板測定的計算公式如下