產(chǎn)品簡介：

Acridine Orange 屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記 DNA,、RNA,，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性,，能透過細胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色,。因此 AO 常用于細胞內(nèi) DNA 和 RNA 進行檢測,。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合,，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 530nm,，激發(fā)后呈綠色熒光,；2、靜電吸引,，帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合,，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm,，激發(fā)后呈紅色熒光,，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,，吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 中顯綠色,，與單鏈 DNA 或 RNA 結(jié)合時發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。

     AO 染色液(1mg/ml)為儲存液,，使用時應(yīng)稀釋到合適濃度后使用,。染色后在熒光顯微鏡下觀察,，AO 可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光,；而在凋亡細胞中,，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體,。AO 使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒,；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。AO 染色常與 EB 染色合用雙染,，因 EB 只染死細胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,，由此可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞,。

自備材料：

1,、熒光顯微鏡

2、低速離心機

3,、PBS

4,、細胞計數(shù)板

5、載玻片,、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

1,、收集細胞(采用流式細胞儀檢測時，應(yīng)先固定細胞),，用 PBS 清洗細胞 1 次,，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至 10⁶/ml。

2,、取適量的細胞懸液,，加入 Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使 AO 終濃度為 8.5～17 μg/ml,，輕輕混勻,。

3、室溫避光染色 15～20min,，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析,。

4、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)波長 488nm),，計數(shù)并拍照,。

染色結(jié)果：

注意事項：

1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨使用,。

2,、吖啶橙染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細胞,、凋亡細胞及壞死細胞,。

3、如有低溫離心機進行離心效果更佳,。

4,、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強光下的時間。

5,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個月有效,。常溫運輸,，4℃保存。