注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

貨號(hào)：JSK541

規(guī)格：50T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 60mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑一：液體 60mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑二：液體 0.33mL×2 瓶，4℃保存,；用時(shí)每瓶加入 5mL 試劑一,；用不完的試劑 4℃保存一周； 試劑三：液體 10 mL×1 瓶,，4℃保存,。

產(chǎn)品說(shuō)明：

POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動(dòng)物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，可催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物，具有消除過(guò)氧化氫和酚類(lèi),、胺類(lèi)毒性的雙重作用,。POD 催化 H₂O₂ 氧化特定底物， 在 470nm 有特征光吸收,。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、1mL 玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一,、粗酶液提?。?/span>

1,、 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,；8000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測(cè),。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入

1mL 提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測(cè)。

2,、 血清（漿）樣品：直接檢測(cè),。二、測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 470nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、測(cè)定前將試劑一、二和三 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）放置 10min,。

3,、樣本測(cè)定表

在 1mL 玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí),，記錄 470nm 下 30s 時(shí)的吸光值

A1 和 1min30s 后的吸光值 A2,。計(jì)算ΔA＝A2-A1。注意：

a. 若一次性測(cè)定樣本較多,，可將試劑一,、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,，在 37℃（哺乳動(dòng)物） 或 25℃（其它物種）放置 10min 以上,，測(cè)定時(shí)加入 15µL 樣本和 1055µL 混合液測(cè)定,。

b. 如果ΔA 小于 0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到 5min,。如果ΔA 大于 0.5,，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

三,、POD 活性計(jì)算：

1、 血清（漿）POD 活性

單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位,。計(jì)算公式：POD（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA

2,、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞 POD 活性

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位,。

POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位,。

POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。

POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，1.07mL,；V 樣：加入樣本體積，0.015mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，1 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重,，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬(wàn),。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床,、診斷,、食品、化妝品檢測(cè)等用途,！