基本信息

僅供科研使用,，不可用于臨床診斷和治療

凍存細(xì)胞接收后的處理：

1）干冰運(yùn)輸,，收到細(xì)胞后推薦直接復(fù)蘇，轉(zhuǎn)入液氮暫存可能導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇率降低,；

2）收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系,。

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后,，請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁,，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們,。

2）75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片,，若有貼壁細(xì)胞脫落，可收集上清離心,，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,。

3）建議收到當(dāng)天不要消化處理，如果細(xì)胞長滿90%,，可選擇傳代處理,。

4）如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費重發(fā)服務(wù),。

注：發(fā)貨用培養(yǎng)基不可再次用來培養(yǎng)細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入1ml0.25%胰酶（T25瓶）,，使胰酶覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③細(xì)胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷）,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，細(xì)胞回縮，即將脫壁而未脫壁時（可用槍輕輕吹打確認(rèn)細(xì)胞是否脫壁）,，加入培養(yǎng)基終止消化（若消化過度可能會對細(xì)胞存活率產(chǎn)生較大影響）,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

注：第一次傳代推薦1:2傳代,，后續(xù)可根據(jù)細(xì)胞生長以及客戶需求自行確定。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,；

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶或60mm培養(yǎng)皿中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1ml0.25%胰酶（T25瓶）,，使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

②細(xì)胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷）,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞回縮,，即將脫壁而未脫壁時（可用槍輕輕吹打確認(rèn)細(xì)胞是否脫壁）,，加入培養(yǎng)基終止消化（若消化過度可能會對細(xì)胞存活率產(chǎn)生較大影響）；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。