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當(dāng)前位置:青島捷世康生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>吉姆薩染色液(Giemsa stain,1:9,染色體專用)說明書
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
Giemsa Stain以進(jìn)口的姬姆薩色素,、甲醇為主要原料,,含*襯染劑,經(jīng)研磨配制而成,,能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果,,經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片,、細(xì)菌、染色體顯帶,、原生動(dòng)物寄生蟲等染色,。吉姆薩色素(又稱姬姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成,Giemsa染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同,,姬姆薩染色液對(duì)胞漿著色力較強(qiáng),,能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對(duì)血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青,、嗜酸性,、嗜堿性顆粒,著色清晰,,但是對(duì)胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳,,故姬姆薩染液常與瑞氏染 液聯(lián)合使用。
許多染料對(duì)DNA都有不同程度的親和性,,故都可用作染色體的染色,。在染色體的常規(guī)染色中,一般用吉姆薩,、地衣紅,、福爾根、石碳酸復(fù)紅等都可獲得良好的染色效果,。G顯帶技術(shù)是指將染色體玻片標(biāo)本經(jīng)過胰蛋白酶處理后,,再用吉姆薩進(jìn)行染色,,使每條染色體沿其長(zhǎng)軸顯示出一定數(shù)量的、寬窄和深淺不同的橫紋,,即帶型,。由于人類22 種常染色體和X、Y 染色體的帶型各具特征,,根據(jù)帶型可清楚地分辨出每條染色液,。GiemsaStain(1:9,染色體專用)由10×儲(chǔ)存液和磷酸鹽緩沖液組成,,1:9 混合后使用,,主要用于染色體G帶染色。
自備材料:
1.PHA,、秋水仙素
2.0.075M 溶液
3.恒溫培養(yǎng)箱
4.甲醇乙酸固定液(甲醇:冰乙酸=3:1)
5.載玻片,、顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
1、配制 Giemsa Stain 工作液:按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合,,即取1份 Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻,,即為GiemsaStain工作液,該工作液為即用型試劑,,不易保存,,即用即配。如效果不佳,,可改變配制比例,。
2、培養(yǎng):取人類外周血3~5ml在PHA(一般工作濃度約60ug/ml),、血清等條件下體外培養(yǎng)3天,,加入BrdU和(或)秋水仙素(一般工作濃度約0.5ug/ml),培養(yǎng)30~60min并收集細(xì)胞即2000g離心5min,,留取沉淀,。
3、低滲:加入5~8ml提前37℃預(yù)熱的0.075M溶液37℃低滲處理20~30min,。
4,、固定:加入1ml新配制的甲醇乙酸固定液,輕輕混勻,,2000g離心5min,,留取沉淀;再次加入2~3ml甲醇乙酸固定液,,輕輕混勻,,室溫固定15~20min,2000g離心5min,,留取沉淀,;再次加入2~3ml 甲醇乙酸固定液,,重復(fù)該步驟,留取沉淀,。
5,、滴片:加入少許甲醇乙酸固定液至沉淀中,輕輕混勻制成細(xì)胞懸液,。滴加2~3滴細(xì)胞懸液于提前遇冷的載玻片上,,吹散水蒸氣熏蒸促使細(xì)胞破裂(亦可高空垂直滴下細(xì)胞懸液促使細(xì)胞破裂),70℃烤片2h,。
6,、消化:用0.025~0.05%的胰蛋白酶溶液處理載玻片30~90min,依據(jù)胰蛋白酶的濃度,、批次等摸索處理時(shí)間,。
7、染色:滴加Giemsa Stain工作液覆蓋玻片,,室溫染色15~30min,。
8、用自來水或蒸餾水緩慢從載玻片一端沖洗,,將多余染色液沖掉,。空氣干燥,。
9,、先用低倍鏡瀏覽整張玻片標(biāo)本,找到分散良好且染色體長(zhǎng)短適中的分裂相,,再用油鏡觀察并識(shí)別染色體G顯帶核型。
注意事項(xiàng):
1,、涂片染色中Giemsa染色后,,請(qǐng)勿先去除染液或直接對(duì)涂片用力沖洗。
2,、如果染色過深或過淺,,應(yīng)調(diào)整染色時(shí)間或工作液濃度,。
3,、pH 值對(duì)染色有一定影響,載玻片應(yīng)清潔,、無酸堿污染,,以免影響染色效果,。
4、染色液經(jīng)稀釋后液面有金屬光澤則表示染液有染色作用,,否則染色液可能失效,。
5,、染色液可重復(fù)使用,但不能多次重復(fù),,若有沉淀物應(yīng)過濾后使用,。
有效期:24個(gè)月有效。
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