產(chǎn)品簡介：

植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀,，常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,，具有還原性,，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖,?？梢岳枚嗵悄鼙凰崴鉃閱翁堑奶匦酝ㄟ^測定水解后的單糖含量對總糖進行測定。

DNS 試劑(Ghose 法)主要成分是苯酚,、氫氧化鈉,、酒石酸鉀鈉、亞硫酸氫鈉和 3,5-二硝基水楊酸,，可用于測定植物總糖和還原糖的檢測,，其原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物,，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系,。在 540nm 處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系,，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量,。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

自備材料：

1,、蒸餾水

2、50ml 離心管

3,、離心機

4,、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計

6,、鹽酸溶液,、氫氧化鈉溶液

操作步驟(僅供參考)：

1,、還原糖的提取：

①稱取植物樣品 0.5~3g,，剪碎,，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次,，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②50℃水浴 30min,，并不時攪拌,，以便還原糖*浸出。

③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管,，4000g 離心 5min,。

④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水,，混勻,，再次 4000g 離心 5min。

⑤留取上清液,，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液),，混勻,，作為還原糖待測液。

2,、總糖的水解和提?。?/span>

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎,，加入蒸餾水約 3ml 勻漿,，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次,，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器,。

②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻,，煮沸 30min,，并不時攪拌。

③取 2 滴滴加于載玻片上,，滴加 1 滴顯色液,，檢查水解是否*，如已經(jīng)水解*則不顯示藍(lán)色,。

④水解完畢后,，冷卻至室溫,，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4 左右,，用蒸餾水定容至 100ml,，混勻，4000g 離心 5min 或過濾,，獲得上清或濾液,。

⑤取上清或濾液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml,，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液),，取1ml 總糖水解液，測定其還原糖的含量,。

3,、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進行操作,，以 0 號調(diào)零,，檢測 540nm 處吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo),，各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

4、還原糖測定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1ml,，分別加入 DNS 試劑 2ml,， 其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm 處測定各管的吸光度,。

計算：

還原糖的百分含量：

還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

總糖的百分含量：

總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

式中：

     C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)

 VT=提取液的體積(ml)

 m=植物樣品的質(zhì)量(mg)

Vs=測定時用的樣品體積(ml)

DNS 試劑(Ghose法)注意事項：

1,、 該試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降,，盡量避光保存,。

2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時,，應(yīng)小心操作,，避免傷人。

3,、 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為 11.6M,，應(yīng)稀釋至 6M 后使用。

4,、 待測樣本如不能及時測定,，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定,。

5,、 如果樣品還原糖濃度過高,，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),。

6,、 總糖計算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用,，×0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中,，扣除水解時所消耗的水量。

有效期： 12 個月有效,。