產(chǎn)品特點(diǎn)：

簡(jiǎn)單快速：1 h內(nèi)即可獲得超純的基因組DNA,。

廣 泛：適用于血液、多種動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織等,。

超 純：獲得的DNA純度高,，可直接用于PCR、酶切,、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

1. 使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇,。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。

3. 若緩沖液GA或GB中有沉淀,，可在37℃水浴中重新溶解,，搖勻后使用。

4. 所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī),，室溫下離心,。

 操作步驟

使用前請(qǐng)先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇,，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

1. 處理材料

a. 如提取材料為血液,，可直接使用200 μl新鮮,、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足200 μl

可加緩沖液GA補(bǔ)足,；

注意：如需處理更大體積血液,，如300 μl-1 ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液 （例如,，300 μl血液加入900 μl紅細(xì)胞裂解液）,，顛倒混勻， 室溫放置5 min,，期間再顛倒混勻幾次,。10000 rpm(~11,500×g)離心1 min（若離心機(jī)高轉(zhuǎn)速不允許，可3000 rpm(~3,400×g)離心5 min）,，吸去上清,，留下白細(xì)胞沉淀，加200 μl緩沖液GA,，振蕩至*混勻,。

紅細(xì)胞裂解液本公司另外有售（目錄號(hào)：RT122），可根據(jù)需要來(lái)決定購(gòu)買(mǎi),。

b. 如果處理血樣為禽類(lèi),、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級(jí)生物的抗凝血液,，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞,，因此處理量5-20 μl，可加緩沖液GA補(bǔ)足200 μl后進(jìn)行下面的裂解步驟,。

c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液,，然后10,000 rpm(~11,200×g)離心1 min，倒盡上清,，加200 μl緩沖液GA,，振蕩至*懸浮,；

d. 動(dòng)物組織（脾組織用量應(yīng)少10 mg）應(yīng)先打碎處理為細(xì)胞懸液,，然后10,000 rpm(~11,200×g)離心1 min，倒盡上清,，加200 μl緩沖液GA,，振蕩至*懸浮。

注意：如果需要去除RNA,，可加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客戶(hù)自備,，目錄號(hào)：RT405-12）,，振蕩15 sec，室溫放置5 min,。

2. 加入20 μl Proteinase K溶液,，混勻。

a. 提取血液基因組時(shí),，只需加入Proteinase K混勻,，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。

b. 提取細(xì)胞基因組時(shí),，只需加入Proteinase K混勻,，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。

c. 提取組織基因組時(shí),，加入Proteinase K混勻后,，在56℃放置，直至組織溶解,，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,，再進(jìn)行下一步驟。

注意：不同組織裂解時(shí)間不同,，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過(guò)夜）,。不會(huì)影響后續(xù)操作。每小時(shí)顛倒混合樣品2-3次,，用水浴振蕩器也可,。

3.加入200 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻,，70℃放置10 min,，溶液應(yīng)變清亮,，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,。

注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失,，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不*,，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純,。當(dāng)血液體積≤200 μl且沒(méi)有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳,，水浴后顏色可能為深褐色,，注意溶液中沒(méi)有團(tuán)塊等沉淀。

4.加人200 μl 無(wú)水乙醇,，充分振蕩混勻15 sec,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

5.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）,， 12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec,，倒掉廢液，將吸附柱CB3放回收集管中,。

6.向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD （使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇）,，12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液,，將吸附柱CB3放入收集管中,。

7.向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec,，倒掉廢液,，將吸附柱CB3放入收集管中。

8.. 重復(fù)操作步驟7,。

9.將吸附柱CB3放回收集管中,，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，倒掉廢液,。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘,，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切,、PCR等）實(shí)驗(yàn)。

10.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中,，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩沖液TE,，室溫放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min,，將溶液收集到離心管中,。

注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl，體積過(guò)小影響回收效率,。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH₂O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi),，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率,；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解,。為增加基因組DNA 的得率,，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室溫放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g )離心2 min,。