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Trizol是一種用于細(xì)胞或組織總RNA抽提的試劑,。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的TRIzol*相似的原理和方法,,抽提的方法和步驟*相同。
Trizol的顏色和TRIzol相同,,加入氯后上層呈無(wú)色,,下層呈紫紅色,便于吸取上層水相,。
Trizol對(duì)動(dòng)植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提均適用,。
Trizol可以抽提長(zhǎng)達(dá)15 kb的RNA,也可以抽提microRNA等小RNA,。抽提小RNA時(shí)宜-70℃沉淀過(guò)夜,。
Trizol抽提所得RNA無(wú)DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0,。
裂解細(xì)胞或和組織共勻漿時(shí),,Trizol可以保持樣品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解,。
每一百萬(wàn)細(xì)胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA,;每毫克組織用Trizol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異,。
抽提兩個(gè)樣品約需一小時(shí),。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern,點(diǎn)雜交,,純化mRNA,,體外翻譯,RNase protection assay,,cDNA克隆,,以及RT-PCR;也可以用于基因表達(dá)芯片分析,、高通量測(cè)序(deep sequencing)等對(duì)RNA質(zhì)量要求較高的情況,。
Beyozol(R0011)和Trizol(R0016)的成分有細(xì)微差別,實(shí)際抽提效果無(wú)任何顯著差異,。
每100ml Trizol可以抽提100個(gè)六孔板中的樣品或100個(gè)50-80mg的組織樣品,。
保存條件:
4℃保存,一年有效,。
注意事項(xiàng):
需自備異丙醇,,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),,和DEPC水,。DEPC(ST036),DEPC水(R0021)可向我司訂購(gòu)。
所有離心管,,槍頭及相關(guān)溶液都必須無(wú)RNA酶污染,。耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過(guò)夜,,然后滅菌,,烘干。溶液需用DEPC水配制,。加0.01%(體積比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或Milli-Q級(jí)水中,,處理過(guò)夜,滅菌即成DEPC水,。
使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些,。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過(guò)程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來(lái)并剪切樣品。如果不能及時(shí)抽提RNA,,推薦先加入適量Trizol,,并裂解樣品后凍存。
必須戴一次性手套操作,,且盡量不要對(duì)著RNA樣品呼氣或說(shuō)話,,以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作,。
Trizol含有毒物質(zhì)苯酚,,避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛,,請(qǐng)戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏,。如皮膚接觸Trizol,請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗,,如仍有不適,,請(qǐng)聽取醫(yī)生意見。
Trizol抽提總RNA的同時(shí),,理論上也可抽提蛋白和DNA,,但未經(jīng)測(cè)試。有興趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步驟進(jìn)行操作,。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,,不得存放于普通住宅內(nèi),。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
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