本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于檢測牛血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)核?。═B）水平。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中結(jié)核?。?/span>TB）,。用純化的牛結(jié)核病（TB）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中結(jié)核病（TB）相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的結(jié)核?。?/span>TB）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中牛結(jié)核?。?/span>TB）的存在與否,。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后,，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/ 分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的 PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/span>用,。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。?

結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為結(jié)核?。?/span>TB）陰性

陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為結(jié)核?。?/span>TB）陽性

注意事項(xiàng)

1. 操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用,。

2. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

4. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

5. 底物請避光保存,。

6. 試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為 630nm

7. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M 的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存：,；2-8℃。

2. 有效期：6 個(gè)月