動物細(xì)胞/組織細(xì)胞核粗提分離試劑是一種旨在從動物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核細(xì)胞器的經(jīng)典的技術(shù)方法,。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的,。適合于動物組織和培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備,。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于后續(xù)EMSA,、體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng),、核轉(zhuǎn)錄終止（run-off）實驗、轉(zhuǎn)錄圖譜分析（profiling）,、體外核凋亡檢測,、以及核染色質(zhì)、基因組DNA,、核RNA/RNP,、組蛋白的純化等實驗。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,，即到即用,，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

細(xì)胞核是細(xì)胞中大的細(xì)胞器,，細(xì)胞核的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的常用的手段之一,。細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和功能的研究，包括細(xì)胞核的系列活動,、染色質(zhì)結(jié)構(gòu),、基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、RNA合成和操作,、核雙向轉(zhuǎn)運的調(diào)節(jié)機(jī)制,、核凋亡等。從任何組織或細(xì)胞分離細(xì)胞核的技術(shù)方法基本上采用：一,，通過機(jī)械或溫和低滲化學(xué)方法破裂細(xì)胞；第二,，通過低速差速離心獲得粗提細(xì)胞核,；第三,，通過等密度離心獲得高純度的細(xì)胞核，去除所有細(xì)胞漿成分,，例如微粒體,、線粒體、神經(jīng)髓鞘成分,，尤其是與核膜相連的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A） 120毫升

裂解液（Reagent B） 50毫升

保存液（Reagent C） 5毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融,；其余的保存在4℃冰箱里,；裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent ）嚴(yán)格無菌操作；有效保證6月

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（GMS12028）或PBS緩沖溶液（GMS12033）：用于清理細(xì)胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于細(xì)胞脫離

*細(xì)胞培養(yǎng)液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)基

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

4℃臺式離心機(jī)：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織和細(xì)胞

實驗步驟

一,、動物組織細(xì)胞核分離

手術(shù)取出動物組織,，并秤重以確定1克組織重量
（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
（選擇步驟）加入適量的（1克組織需要5毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

移入到一個液氮凍存管
即刻放入液氮罐過夜

次日從液氮罐里取出，即刻（快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
轉(zhuǎn)移到一個預(yù)冷的15毫升錐形離心管
加入預(yù)冷的5毫升裂解液（Reagent B）
渦旋震蕩5秒,，充分混勻
置于冰槽里孵育10分鐘
即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20下）（注意：參見注意事項6）
將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
放進(jìn)4℃臺式離心機(jī)離心15分鐘,，速度為500g
小心抽去上清液
加入200微升預(yù)冷的保存液（Reagent C），混勻沉淀顆粒
即刻移入到預(yù)冷的1.5毫升離心管
放進(jìn)－70℃冰箱里保存

二,、動物細(xì)胞細(xì)胞核分離

準(zhǔn)備5至10瓶75cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶的細(xì)胞（5 X 10⁷）,，直至細(xì)胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面
分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面,，然后抽去
重復(fù)實驗步驟2一次
加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,，鋪滿整個培養(yǎng)平面
置入37℃培養(yǎng)箱3分種
輕輕手擊震動培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落
分別加入10毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
移入一個50毫升錐形離心管
放入臺式離心機(jī)離心10分鐘,，速度為200g
小心抽去上清液
加入10毫升預(yù)冷的清理液（Reagent A）,，混勻細(xì)胞
放入臺式離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
小心抽去上清液
加入預(yù)冷的5毫升裂解液（Reagent B）
渦旋震蕩5秒,，充分混勻
置于冰槽里孵育10分鐘
即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
在冰槽里用勻漿棒勻化細(xì)胞（約20下）（注意：參見注意事項6）
將所有細(xì)胞勻漿物移入15毫升錐形離心管
放進(jìn)4℃臺式離心機(jī)離心15分鐘,，速度為500g
小心抽去上清液
加入200微升預(yù)冷的保存液（Reagent C），混勻沉淀顆粒
即刻移入到預(yù)冷的1.5毫升離心管
放進(jìn)－70℃冰箱里保存

注意事項

本產(chǎn)品為10次操作（1克動物組織或5 X 10⁷細(xì)胞）
所有操作均須在4℃或以下狀態(tài)進(jìn)行
操作時,，避免污染母液,，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent C）
建議使用足夠的組織或細(xì)胞量
建議嚴(yán)格控制操作時間
通常勻化次數(shù)為20下（或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達(dá)到80％的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細(xì)胞類型會存在差異,。用戶可以使用臺酚藍(lán)染色,，通過顯微鏡觀察3微升勻漿物，觀察細(xì)胞裂解程度和計量細(xì)胞核（注意：建議使用純化細(xì)胞核臺酚藍(lán)染色試劑盒——GMS10448）
通常1克動物組織或5 X 10⁷細(xì)胞的細(xì)胞核得率為50%以上（細(xì)胞核計數(shù)）

8．如果需要獲得99％以上純度的細(xì)胞核,，建議使用動物細(xì)胞/組織細(xì)胞核高純超離分離試劑盒－GMS10100.3

本公司提供系列細(xì)胞核分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的細(xì)胞核完整
本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的細(xì)胞核維持正?；钚?/span>
本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶

動物細(xì)胞/組織細(xì)胞核粗提分離試劑盒

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