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產(chǎn)品簡介:
膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇,是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物,,分子式 C27H46O,,
分子量為 3860.65,膽固醇廣泛存在于動物體內,,其中腦,、神經(jīng)組織豐富,在腎,、脾,、皮
膚、肝和膽汁中含量也較高,。
總膽固醇(TC)檢測試劑盒(鄰苯二甲醛比色法)檢測原理是膽固醇及其脂在強酸存在下與鄰苯二甲醛反應,,產(chǎn)生紫紅色化合物,,該化合物在 550nm 波長處有大吸收峰,分光光度計在 550nm 處進行比色測定,,膽固醇含量在 4mg/ml 之內與吸光度呈良好線性關系,。本試劑盒用于人或動物的血清、血漿,、腦脊液,、細胞、組織等樣本中的總膽固醇含量定量測定,,其優(yōu)點是:1,、操作簡便;2,、靈敏,;3、穩(wěn)定,;4,、無需將膽固醇單獨抽提出來或去除樣品中的蛋白質,。本試劑盒僅用于科研領域,,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
試劑(A): 膽固醇標準(1mg/ml) 1ml 4℃ 避光
試劑(B): TC Assay Buffer 100ml RT
試劑(C): 鄰苯二甲醛粉劑 2×10mg 4℃ 避光
試劑(D): 鄰苯二甲醛稀釋液 30ml RT
使用說明書 1 份
自備材料:
1,、 蒸餾水
2,、 生理鹽水或 PBS
3、試管或離心管
4,、 濃硫酸
5,、 分光光度計
操作步驟(僅供參考):
1、 樣本處理:
①血清,、血漿,、腦脊液樣本:從待測樣本中分離出的血清或血漿不應有溶血,直接檢測,,如
超過線性范圍,,用生理鹽水稀釋后檢測。
②細胞樣本:
a,、取適量的細胞(一般推薦>106 以上),,1000g 離心 10min,棄上清,,留取沉淀,。
b、用 PBS 或生理鹽水清洗 1~2 次,,1000g 離心 10min,,棄上清,留取沉淀。
c,、加入 200~300μl 的 PBS 或生理鹽水勻漿,,冰浴條件下超聲破碎細胞,功率 300W,,每
次 3~5s,,間隔 30s,重復 3~5 次,。亦可手動勻漿,,制備好的勻漿液不可離心;亦可用 1~2%
Triton X-100 冰浴 30~60min,,制備好的裂解液不可離心,。
③組織樣本:準確稱取適量組織樣本,按質量(g):生理鹽水=1:4 的比例,,加入生理鹽水,,
冰浴條件下手動或機械勻漿,2500~3000g 離心 10min,,取上清待用,。
2、配制膽固醇標準工作液:按膽固醇標準(1mg/ml):TC Assay Buffer=1:9 的比例準確
混合,,即為膽固醇標準工作液(0.1mg/ml),,然后按下表依次稀釋膽固醇標準工作液。
加入試劑(ml)/管號 0 1 2 3 4
膽固醇標準工作液(0.1mg/ml) 0 0.06 0.12 0.18 0.24
TC Assay Buffer 0.24 0.18 0.12 0.06 0
總膽固醇濃度(mg/ml) 0 1 2 3 4
3,、配制鄰苯二甲醛工作液:取 1 瓶(10mg)鄰苯二甲醛粉劑的準確加入鄰苯二甲醛稀釋液
10ml,,充分混勻,即為鄰苯二甲醛工作液,。4℃避光保存,,2 周有效。
4,、配制強酸工作液:取適量的 TC Assay Buffer 和濃硫酸等量混合,,即為強酸工作液。注
意:本試劑盒不提供濃硫酸,,需用戶自備,,二者混合時一定小心操作,以免誤傷自己,,配制
好的強酸工作液中的硫酸含量應準確,,否則有可能影響顯色效果。
5,、膽固醇加樣:按照下表設置空白管,、標準管,、測定管,溶液應按照順序依次加入,,并注
意避免產(chǎn)生氣泡,。
加入試劑(ml) 空白管 標準管 測定管
蒸餾水 0.006 0.006 -
系列膽固醇標準工作液(0~4 號) - 0.24 -
待測血清或其他樣本 - - 0.006
TC Assay Buffer 0.24 - 0.24
鄰苯二甲醛工作液 0.12 0.12 0.12
強酸工作液 2.4 2.4 2.4
6、膽固醇測定:充分混勻, 靜置 10min,,1cm 比色杯,,以分光光度計測定 550m 吸光度,
以空白管調零,,讀取標準管和各待測管的吸光度,。
計算:以系列膽固醇濃度(0~4 號)為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,,作標準曲線,,以
測定管的吸光度照標準曲線,求出待測樣本的濃度,。
注意事項:
1,、 上述低溫試劑避免反復凍融,以免失效或效率下降,。
2,、 本法可直接用于檢測腦脊液中的 TC 含量,也可直接檢測尿液中的 TC 含量,。
3,、 待測樣本如不能及時測定,應置于 2~8℃保存,,3 天內穩(wěn)定。
4,、 如果樣本 TC 濃度過高,,結果可能呈假性降低,應用生理鹽水稀釋后重測,,結果乘以稀
釋倍數(shù),。
有效期: 6 個月有效。常溫運輸,,4℃保存,。
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