6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶,，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯,，同時將NADP⁺還原為NADPH，供

生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用,。因此 6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程

度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力,。

測定原理：

G6PDH 催化NADP⁺還原生成NADPH，在340 nm 下測定NADPH 增加速率,。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計,、水浴鍋、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、1 mL 石英比色皿、研缽,、冰和蒸

餾水,。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑一：液體47.5 mL×1 瓶,，4℃保存,；

試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存,；

試劑三：粉劑×1 支,，-20℃保存；

樣本的前處理：

1,、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為1000~5000：1 的比例（建議2000 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL

提取液）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W,，超聲3s,，間隔10s，重復(fù)30

次）,；8000g 4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織,，

加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1,、分光光度計預(yù)熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）

水浴10min 以上,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

3,、在1mL 石英比色皿中加入50μL 樣本和950μL 試劑一,，混勻后立即記錄340nm 處1min

后吸光值A1 和 6min 后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1,。

注意：若ΔA 大于0.5,，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),?；?qū)⒎磻?yīng)

時間縮短至2min，使A2-A1 小于0.5,，可提高檢測靈敏度,。