土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase,，S-NR）試劑盒說明書

                                    分光光度法 50管/24樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關鍵酶,。研究 S-NR  的活性

對合理施肥,，降低氮素的損失具有重要意義。

測定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,，NO3ˉ  +NADH⁺H  →  NO2ˉ +NAD＋  +H 2 O,；產生的亞

＋

硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對–氨基苯磺酸及  α -  萘胺定量生成紅色偶氮化合物,；生成的

紅色偶氮化合物在  540 nm  有大吸收峰,，可用分光光度法測定。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計,、水浴鍋,、臺式離心機、可調式移液器,、1mL玻璃比色皿和蒸餾水,。

試劑的組成和配制

試劑一：液體 10mL×1瓶，-20℃保存,。

試劑二：液體 4mL×1瓶，-20℃保存,。

試劑三：液體 12.5mL×1瓶,，4℃保存（如出現(xiàn)結晶析出,，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

試劑四：液體 12.5mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑五：標準品儲備液 1mL，-20℃保存,。

0.1μmol/mL標準液的配制：用時將試劑五稀釋100倍,，即取0.1ml 加蒸餾水定容至10ml。

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或 37度烘箱風干,，過30~50目篩,。

測定操作表

混勻，室溫顯色 20min后,，4000g,，25℃離心10min，用蒸餾水調零,，540nm下讀取各管吸

光值,。標準管和空白管只需測一次。每個測定管設一個對照管,。

S-NR活性計算：

單位的定義：每天每g土樣中產生1μmol NO2ˉ的量為一個S-NR活力單位,。

S-NR（μmol /d/g）=C標準×（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）×V反總÷W÷T=12×

（A測定管-A對照管）÷（A標準管-A空白管）

C 標準管：標準管濃度，0.1μmol/mL,；V 反總：反應體系總體積,，0.5mL；T：反應時間,，

1h=1/24d,； W：樣本質量，0.1g,。