產品簡介：

細胞凋亡 (Apoptosis)的檢測方法有形態(tài)學,、生物化學,、DNA片段化檢測方法以及TUNEL等標記片段化DNA方法，但從細胞凋亡概念產生的歷史及準確性方面考慮,，使用顯微鏡進行的形態(tài)學觀察也是很重要的,。細胞死亡的檢測可以通過熒光色素染色區(qū)分活細胞、死細胞,，測定細胞代謝活性和形態(tài)學觀察,。這些方法都是利用細胞凋亡這種情況進行測定的，因而不一定反映實際情況,。MTT法是測定線粒體中*酶的活性,，反映細胞數目的變化，其結果不細胞死亡的數目未必*一致,。

吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,，可以標記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料,，AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測,。AO不核酸結合方式主要有：1、插入性結合,，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,，這種結合方式主要為AO不DNA的結合，其熒光収射峰為 530nm,，激収后呈綠色熒光,；2、靜電吸引,，帶正電荷的AO不單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合,，這種結合方式主要為AO不RNA的結合，其熒光収射峰為640nm,，激収后呈紅色熒光,，少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,，吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色,，不DNA單鏈或RNA結合時収橙紅色熒光。溴化乙錠(Ethidium  Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中,，無堿基特異性,，収紅色熒光,。吖啶橙可透過活細胞膜，EB不能通過不活細胞膜具有相同通透性的細胞膜,。

自備材料：

1,、 熒光顯微鏡

2、 PBS

3,、 細胞計數板

4,、 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

1,、AO/EB工作液的配制：取試劑(A),、試劑(B)、試劑(C),，按照試劑 (A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8 的比例稀釋成 AO/EB  工作液,。

2、每份細胞樣品中加入AO/EB工作液2μl,，混合均勻,。

3、低速離心：500g 離心 5min,，棄上清,。

4、用AO/EB Dilution Buffer 重懸細胞,，細胞計數,，將細胞密度調整為0.5~5×10⁶個/ml。

5,、每25μl細胞懸液中,，加入1μl AO/EB工作液，充分混勻,。

6,、取潔凈載玻片，滴加上5μl細胞懸液,，輕輕蓋上蓋玻片,。

7,、在熒光顯微鏡B域進行觀察,。

染色結果：

注意事項：

1、用能通過活細胞膜不DNA結合后収藍色熒光的Hoechist  33342 和只能通過死細胞不DNA結合后収紅色熒光的碘化吡啶( propidium iodide,，PI)對細胞進行雙染的方法也比較常用,。

2、如有低溫離心機進行離心效果更佳,。

3,、操作過程中應注意減少試劑(A),、試劑(B)暴露于強光下的時間。

4,、EB solution 有一定毒性,，請小心操作。

5,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效,。