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葡萄糖氧化酶試劑盒說明書

時(shí)間:2016/10/19閱讀:2103
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葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,,GOD)試劑盒說明書

 

分光光度法 50 管/48 樣

測(cè)定意義

GODEC 1.1.3.4)廣泛存在于動(dòng)物、和植物中,,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,,并產(chǎn)生 H2O2,是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一,。

測(cè)定原理

GOD 催化產(chǎn)生 H2O2,,過氧化物酶在有氧存在時(shí)催化 H2O2 分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì),顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系,。

試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備

可見分光光度計(jì),、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、1 mL 玻璃比色皿、研缽,、冰,、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存,;試劑一:液體 40 mL×1 瓶,,4℃保存;試劑二:液體 8 mL×1 瓶,,4℃保存;試劑三:液體 2 mL×1 支,,4℃保存,;

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備

組織處理:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),,進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,取上清,,置冰上待測(cè),。

血清(漿):直接檢測(cè),。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm,,蒸餾水調(diào)零。

2,、GOD 檢測(cè)工作液的配制:用時(shí)將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中,,充分混勻,待用,。3,、測(cè)定前將 GOD 檢測(cè)工作液在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。4,、在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 樣本和 960μL 工作液,,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄 500nm  20s 吸光值 A1  1min20s 后的吸光值 A2,。計(jì)算ΔAA2-A1,。

GOD 活力單位的計(jì)算

1、血清(漿)GOD 活力的計(jì)算

單位定義mL 血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位,。

GODU/mL=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷V ÷T=3333×ΔA

2,、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算(1)按蛋白濃度計(jì)算

單位定義mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

GODU/mg prot=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(V ×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位,。

GODU/ g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109W ×V ÷V 樣總)÷T=3333×ΔA÷W V 反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3 Lε:氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù),,7.5×103 L / mol /cm,;

d:比色皿光徑,1cm,;V 樣:加入樣本體積,,0.04 mLV 樣總:加入提取液體積,,1 mL,;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min,; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mLW:樣本質(zhì)量,,g,。

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