HPLC分析中,，在se譜柱正常,，樣品靈敏度足夠，分析方法合適,，se譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度）,，峰型應(yīng)對稱而尖銳。但是,，在對樣品了解程度不夠,，方法不妥，樣品處理方法及進樣方式不合理下,，會出現(xiàn)各種意想不到的問題,，而對se譜峰難以作出合理的解釋，尤其對于新手更是如此。下面根據(jù)本人幾年工作的體會,，提出一些看法,，向同仁指教。 se譜雙峰指的是明是一種物質(zhì),，但在se譜圖中出現(xiàn)雙峰,，而表明含二種物質(zhì)。我將這種情況分為四種原因,。
1 se譜柱 如果你分析樣品時發(fā)現(xiàn)每個se譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快,，雙峰的可能性會減少），尤其采用單一純物質(zhì)時,，可以肯定se譜柱出問題－柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失,。如果進樣量少，原來se譜柱正常,，色譜峰的形狀多為一da峰帶一小峰,，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵,，將色譜柱反過來接,，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉,，再反過來,，一般情況下就行了。當然不反沖,，正沖有時也會正常的,。如果峰拖尾，雙峰強弱相差不da,，柱頭固定相變臟或流失可能性更da,，這是可以將進樣那頭擰開，將微孔濾片超聲,，柱頭刮去一部分填料,，重新填上新填料擰緊，不過這種活,，需要一定技術(shù),，同時不能老干那種事，否則用不了幾次,，色譜柱就會應(yīng)柱效很低而報廢,。
2 溶劑極性及進樣量 許多HPLC分析者對此可能不以為然，一般的HPLC的書籍和文獻都不會提到這方面的內(nèi)容,，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個很重要的原因,。目前HPLC分析多為反相se譜,，流動相多為甲醇、乙腈,、水,，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解,。溶解方法是用流動相溶解,，但是很多情況是不一致的。當用溶劑極性強度da的試劑,，如純甲醇,、純乙腈，純乙醇,，而分析體系中以水為主,，樣品進樣量da,，如定量管為20ul,，此條件下*可以肯定，單一的純物質(zhì)出雙峰,，第二峰比第—峰?。看味疾惶粯樱彝衔?，保留時間會提前（相對進樣量少而言）,，將進樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太da,，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。上面提到進樣量造成雙峰的一個原因,，另一個原因是,，進樣量不一定大，但量很大,，se譜圖上的雙峰緊靠在一起,，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快,，也可能是se譜柱問題）,。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由于進樣量過大,，se譜柱過載造成的,。
3 樣品的特性 有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象,，而這種互變異構(gòu)體無法分開,，而是以一個動態(tài)平衡存在。在se譜分析時，在一個特定的條件下,，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰,，雙峰靠的很近，基本齊高,，不拖尾,，條件稍一變化，尤其pH,，雙峰現(xiàn)象將消失,，如紅霉素等。有的樣品紫外的se譜圖上看不到雙峰,，但在LC－MS下,，用質(zhì)譜檢測器，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯,，例如我分析過的農(nóng)藥啶蟲瞇（吡蟲清）,。
4 參數(shù) 記錄的參數(shù)一般都內(nèi)定的，不必修改,，但GC和HPLC的參數(shù)是不*一致的,，例如C－R3A數(shù)據(jù)記錄儀上的一般記錄時間間隔GC為2ms，HPLC 為5ms,，如果記錄間隔時間縮短,，一個峰將變?yōu)槎€峰或更多。
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