HPLC分析中，在se譜柱正常,，樣品靈敏度足夠,，分析方法合適，se譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下（不包括梯度）,，峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳,。但是，在對(duì)樣品了解程度不夠,，方法不妥,，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問題,，而對(duì)se譜峰難以作出合理的解釋,，尤其對(duì)于新手更是如此。下面根據(jù)本人幾年工作的體會(huì),，提出一些看法,，向同仁指教,。 se譜雙峰指的是明是一種物質(zhì)，但在se譜圖中出現(xiàn)雙峰,，而表明含二種物質(zhì)。我將這種情況分為四種原因,。
1 se譜柱 如果你分析樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)se譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快,，雙峰的可能性會(huì)減少），尤其采用單一純物質(zhì)時(shí),，可以肯定se譜柱出問題－柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失,。如果進(jìn)樣量少，原來se譜柱正常,，色譜峰的形狀多為一da峰帶一小峰,，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵,，將色譜柱反過來接,，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉,，再反過來,，一般情況下就行了。當(dāng)然不反沖,，正沖有時(shí)也會(huì)正常的,。如果峰拖尾，雙峰強(qiáng)弱相差不da,，柱頭固定相變臟或流失可能性更da,，這是可以將進(jìn)樣那頭擰開，將微孔濾片超聲,，柱頭刮去一部分填料,，重新填上新填料擰緊，不過這種活,，需要一定技術(shù),，同時(shí)不能老干那種事，否則用不了幾次,，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效很低而報(bào)廢,。
2 溶劑極性及進(jìn)樣量 許多HPLC分析者對(duì)此可能不以為然，一般的HPLC的書籍和文獻(xiàn)都不會(huì)提到這方面的內(nèi)容,，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個(gè)很重要的原因,。目前HPLC分析多為反相se譜，流動(dòng)相多為甲醇,、乙腈,、水,，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解,。溶解方法是用流動(dòng)相溶解,，但是很多情況是不一致的。當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度da的試劑,，如純甲醇,、純乙腈，純乙醇,，而分析體系中以水為主,，樣品進(jìn)樣量da，如定量管為20ul,，此條件下*可以肯定,，單一的純物質(zhì)出雙峰，第二峰比第—峰?。看味疾惶粯樱?，且拖尾，保留時(shí)間會(huì)提前（相對(duì)進(jìn)樣量少而言）,，將進(jìn)樣量減少一半以上,，峰型將變?yōu)檎！＿@是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太da,，而流動(dòng)相來不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的,。上面提到進(jìn)樣量造成雙峰的一個(gè)原因，另一個(gè)原因是,，進(jìn)樣量不一定大,，但量很大，se譜圖上的雙峰緊靠在一起,，基本上齊高,，不拖尾（如果出峰很快，也可能是se譜柱問題）,。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了,，這是由于進(jìn)樣量過大，se譜柱過載造成的,。
3 樣品的特性 有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無法分開,，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在,。在se譜分析時(shí)，在一個(gè)特定的條件下，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰,，雙峰靠的很近,，基本齊高，不拖尾,，條件稍一變化,，尤其pH，雙峰現(xiàn)象將消失,，如紅霉素等,。有的樣品紫外的se譜圖上看不到雙峰，但在LC－MS下,，用質(zhì)譜檢測(cè)器，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯,，例如我分析過的農(nóng)藥啶蟲瞇（吡蟲清）,。
4 參數(shù) 記錄的參數(shù)一般都內(nèi)定的，不必修改,，但GC和HPLC的參數(shù)是不*一致的,，例如C－R3A數(shù)據(jù)記錄儀上的一般記錄時(shí)間間隔GC為2ms，HPLC 為5ms,，如果記錄間隔時(shí)間縮短,，一個(gè)峰將變?yōu)槎€(gè)峰或更多。
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