液相色譜柱使用心得
柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配
色譜柱是消耗品,，不是儀器原配的情況很多，如果接頭和柱頭深度匹配將會產(chǎn)生漏液或者死體積過大的現(xiàn)象,。接頭比柱頭深度長,，不易擰緊而漏液；接頭比柱頭深度短,，柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積,，使譜帶展寬和峰拖尾。
溶劑的匹配轉(zhuǎn)換
色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,，如果和流動相不匹配,，使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。特別是流動村j含緩沖鹽時,，如保存溶劑足純有機(jī)相或有機(jī)相比例高,，直接將新柱接人使用，會導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,，造成柱頭堵塞,。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用，用10％的有機(jī)溶劑保持即可,。
流動相及待測樣品的過濾
日常分析工作中,，我們使用的流動栩和待測樣品應(yīng)用0．45pm濾膜過濾后再連接或注入到色譜儀上。對于有機(jī)相比例高的流動栩可以一起過濾出來備用,，但是有機(jī)相比例小的流動相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾,，分析結(jié)束時一定要先用10％的有機(jī)溶劑沖洗管路及色譜柱，為有機(jī)相少的流動相容易滋生細(xì)菌,，造成色譜柱堵寒,，影響色譜柱性能。
色譜柱分析時應(yīng)進(jìn)行平衡和老化
進(jìn)行的方法是運(yùn)行幾次完整的分析程序(包括進(jìn)樣),，直到觀察到峰形,、保留時間和峰面積穩(wěn)定為止。對某些特定的待測物,，如分子量大于1000的,，閃擴(kuò)散速度慢，老化時間相應(yīng)要長,，可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化,。
pH使用范圍
一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范足2—8，如果選用的是高品質(zhì)硅膠,，加上高密度鍵合和雙封尾,，使pH耐受范同zui大提高到lO,。注射用頭孢拉定流動村1pH值為8,，對色譜柱傷害很大,，需要選擇pH值耐受性高的色譜柱。
峰形異常
峰形對稱性的優(yōu)劣對峰面積和分離度有很大的影響,，從而影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性,。先檢查樣品足否過載，由于樣品過載引起的峰形后拖不能通過改變色譜條件消除,。如果發(fā)現(xiàn)過載,，需降低進(jìn)樣量(包括進(jìn)樣體積或濃度)，進(jìn)樣量越小,，峰形越好,，例子如頭孢尼西鈉的測定。其次,，硅醇基次級保留引起部分峰拖尾,。這種情況發(fā)生，選擇高密鍵合和*的雙蜂尾工藝的色譜柱能改善峰形,。另外,，溶解樣品的溶劑洗脫能力比流動相強(qiáng)會發(fā)生峰前延，所以樣品選用流動相溶解,。
色譜柱保存
短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳,，以盡量減少下次使用的平衡時間。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純醇或乙腈,，使用80％左右有機(jī)相保存也屬好的選擇,，且足以避免長菌。強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑,。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,，可加0．05％*溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期,，都推薦保存住所用流動相巾,。
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