一,、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒

樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板,，篩板被堵住不僅會(huì)引起柱壓的升高,，而且也會(huì)引起柱效下降,，因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均,，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬,，從而使柱效下降,。因此，建議使用超純水和色譜純?cè)噭?，在分析樣品前?duì)樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,，流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。

二,、流動(dòng)相的pH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)
由于填料中存在Si-C和Si-O鍵,，流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降,，使用壽命變短,。由于流動(dòng)相的pH 控制不當(dāng)而對(duì)色譜柱造成的損害，通常很難使色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對(duì)待,，嚴(yán)格控制流動(dòng)相的pH值,。

三、使用保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),，因?yàn)楸玫哪p,、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,，堵塞篩板,，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降,。保護(hù)柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板,，其孔徑與色譜柱孔徑相同,，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,，因此,，除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,。
如果確認(rèn)色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的,，可選擇以下方式進(jìn)行補(bǔ)救：
1、先在色譜柱前加上保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,，然后用甲醇,、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2,、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,，然后反向使用。

四,、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出,，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,，使填料板結(jié)，柱壓上升,；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低,。緩沖鹽析出后,，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱使用壽命非常重要,。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話(huà)：使用前要過(guò)濾，使用后要沖洗,。具體方法如下：

1,、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min流速?zèng)_洗色譜柱過(guò)夜,。
2,、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前，用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min流速?zèng)_洗60min,，再用該過(guò)渡流動(dòng)相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min,。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出,。
注意：過(guò)渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同,，區(qū)別只是過(guò)渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。
3,、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法：
1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過(guò)夜,。

五、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,，對(duì)樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,，不僅引起峰型變寬、拖尾,，使柱效下降,，同時(shí)也會(huì)引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會(huì)導(dǎo)致柱壓升高,。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對(duì)色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng),，需要一定的時(shí)間才會(huì)體現(xiàn)出來(lái)，但對(duì)許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,，很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì),，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱,。 clin-lab.com

清洗方法：
1,、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽,，然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min,。
2、使用過(guò)緩沖鹽：分析完成后,，先用上述方法除去緩沖鹽,，然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補(bǔ)救方法：
水——乙氰——氯仿（或異丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
 

色譜柱日常維護(hù)注意事項(xiàng)：

（1）流動(dòng)相的PH值應(yīng)有使用范圍內(nèi) 
由于流動(dòng)相的PH 控制不當(dāng)而對(duì)色譜柱造成的損害,，通常很難是色譜柱恢復(fù),，因此必須認(rèn)真對(duì)待，嚴(yán)格控制流動(dòng)相的PH值,。
（2）去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒 
樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板,，篩板被堵住不僅會(huì)引起柱壓的升高，而且也會(huì)引起柱效下降,，因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均,，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬,，從而使柱效下降,。因此，建議使用超純水和色譜純?cè)噭?，在分析樣品前?duì)樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,，流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。 
（3）使用保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器 
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),，因?yàn)楸玫哪p,、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高,、柱效下降,。保護(hù)柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同,，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大 比例,，因此,，除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,。