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選擇適合高效液相色譜儀需要考慮幾個(gè)因素
高效液相色譜儀可以分為5大部分：高壓輸液泵單元,、進(jìn)樣器單元,、分離單元,、檢測(cè)器單元、色譜數(shù)據(jù)處理單元,，下面我們來(lái)逐一分析,，談?wù)劯咝б合嗌V儀的選型細(xì)則。
1,、高壓輸液泵單元的配置選型：
高效液相色譜儀的高壓輸液方式分為等度方式,、梯度方式兩大類別。
等度方式：在色譜分析過(guò)程中,，流動(dòng)相中各個(gè)組分的比例不隨時(shí)間發(fā)生變化,，例如某次分析過(guò)程中流動(dòng)相中甲醇與水的比例是50：50一直保持不變，那么這種就叫做等度方式,。
梯度方式：在色譜分析過(guò)程中，流動(dòng)相中各個(gè)組分的比例隨時(shí)間發(fā)生發(fā)生變化,，例如某次分析過(guò)程中,，隨著時(shí)間的推移，流動(dòng)相中其中一種(或幾種)溶劑比例逐漸增大,、另一種或幾種劑的比例逐漸減少,，最終那么這種輸液方式就叫做梯度方式。
相應(yīng)以上2種流動(dòng)相輸液方式,，有等度泵和梯度泵這兩種配置方式,。
等度泵：一般采用單泵來(lái)作為高壓輸液泵單元，這是一種簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的配置方式,。
梯度泵：又分為高壓梯度,、低壓梯度。
高壓梯度：常用的是二元高壓梯度泵,，也有三元高壓梯度泵,；我們通常所說(shuō)的雙泵，就是指“二元高壓梯度泵”,。有幾元高壓,，則必須有幾臺(tái)泵,；高壓梯度泵單元，除了幾臺(tái)高壓泵之外,，還需要有配套的流動(dòng)相混合裝置(通常采用混合器),；由于是高壓混合的梯度方式，所以通常不太會(huì)產(chǎn)生氣泡,，脫氣機(jī)通?？梢圆挥门鋫洹?/div>
低壓梯度：與高壓梯度“有幾元高壓就用幾臺(tái)泵”所不同的是,，低壓梯度只需要一臺(tái)高壓泵,，但是在高壓泵的前端，需要加上比例閥(有的公司稱為低壓梯度單元),，通過(guò)比例閥來(lái)調(diào)節(jié)幾種不同流動(dòng)相進(jìn)入高壓泵的比例,，從而實(shí)現(xiàn)梯度淋洗。因?yàn)榈蛪合赂鞣N不同溶劑混合時(shí)可能產(chǎn)生吸熱或放熱,，所以對(duì)于低壓梯度泵單元來(lái)說(shuō),，流動(dòng)相脫氣機(jī)與混合器一樣，都是不可少的,。
高效液相色譜儀(HPLC)的高壓輸液泵單元的選型,，主要是根據(jù)所檢測(cè)項(xiàng)目方法的所需來(lái)定，方法中流動(dòng)相輸液是等度方式,，那么等度泵(單泵)即可滿足需求,；如果方法中規(guī)定需要用到梯度淋洗輸液方式，那么就需要選擇梯度泵了,。
在一些有HPLC分析方法開(kāi)發(fā)任務(wù)的單位,，為了滿足將來(lái)可能的方法開(kāi)發(fā)需要，即便暫時(shí)不需要梯度泵,，也往往會(huì)配備梯度泵以利拓展方法,。
2、色譜數(shù)據(jù)處理單元
高效液相色譜儀的色譜數(shù)據(jù)處理單元,，有數(shù)據(jù)處理機(jī)和色譜工作站兩種,，隨著電腦的普及與應(yīng)用，色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)已經(jīng)漸漸被淘汰,，目前以色譜工作站為主流,。
色譜工作站又分為可否反控兩大類。
可反控工作站：不但能記錄與處理色譜數(shù)據(jù),，而且可以反控高效液相色譜儀的各個(gè)組成單元,。因?yàn)橐恍┛刂浦噶罱涌谂c數(shù)據(jù)傳輸?shù)募夹g(shù)性問(wèn)題，可反控工作站一般是各大儀器廠商自行研發(fā)與設(shè)計(jì)的,，互相之間不能通用,。
不可反控工作站：僅能記錄與處理色譜數(shù)據(jù),，不可反控高效液相色譜儀。不可反控工作站通常是外掛式的,，包含硬件和軟件兩大部分,，硬件部分主要是一個(gè)A/D轉(zhuǎn)換器，將高效液相色譜儀傳輸來(lái)的模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào),，再輸進(jìn)計(jì)算機(jī),；軟件部分主要功能就是把硬件傳輸來(lái)的數(shù)字信號(hào)轉(zhuǎn)換成圖譜并進(jìn)行積分計(jì)算等操作。
不可反控工作站的優(yōu)點(diǎn)是通用性強(qiáng),，但是不可反控儀器,、不便進(jìn)行自動(dòng)化操作。
二極管陣列檢測(cè)器必須要用特殊的三維色譜軟件,。
3,、進(jìn)樣器單元的配置選型
高效液相色譜儀(HPLC)的進(jìn)樣器單元，有2種配置可供選擇：手動(dòng)進(jìn)樣器,、自動(dòng)進(jìn)樣器,。
手動(dòng)進(jìn)樣器：無(wú)論是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口，例如沃特世(Waters),、島津(Shimadzu),、安捷倫(Agilent)，世界上絕大多數(shù)公司均采用美國(guó)Rheodyne公司生產(chǎn)的六通進(jìn)樣閥作為高效液相色譜儀的手動(dòng)進(jìn)樣閥,。
自動(dòng)進(jìn)樣器：自動(dòng)進(jìn)樣器的優(yōu)點(diǎn)就是,，能極大的提高設(shè)備使用效率、減少人力成本,。
4,、分離單元(高效液相色譜柱)
色譜柱是高效液相色譜儀的核心部件。
色譜法最核心的機(jī)制就是把樣品中各個(gè)組分進(jìn)行有效分離,，而實(shí)現(xiàn)分離靠的就是色譜柱。
色譜柱選擇時(shí)需要考慮四大參數(shù)：固定相類型(填料種類),、柱長(zhǎng),、柱內(nèi)徑、填料粒度,。
固定相類型：目前主要有硅膠基質(zhì)的ODS(碳十八),、氨基、氰基,、苯基,、硅膠等色譜柱，以及高分子聚合物的固定相填料,。目前ODS(碳十八)應(yīng)用最為廣泛,，高效液相色譜法大約有80%分離采用的就是ODS(碳十八)填料,。
柱長(zhǎng)：色譜柱的長(zhǎng)度越長(zhǎng)，分離效果越好,，但是背壓也就越大,、柱子價(jià)格就會(huì)越貴。目前柱長(zhǎng)應(yīng)用較多的是375px,、500px,、625px這三個(gè)長(zhǎng)度，尤其以625px最多,。
柱內(nèi)徑：其它幾個(gè)柱參數(shù)不變的情況下,，高效液相色譜柱的內(nèi)徑越小，分離度越好(分離度越高),，但是柱負(fù)載量越小,。常用柱內(nèi)徑是3.9mm、4.6mm,、6.0mm,，尤其以4.6mm為常用。
填料粒徑：根據(jù)色譜法的速率理論,，填料粒徑越小,，分離效果越好；但是填料粒度越小,，在同樣的流動(dòng)相輸送流速下,，對(duì)于高效色譜儀高壓泵的背壓也就越大，對(duì)于高壓泵的加壓能力,、密封性能也就要求越高,。高效液相色譜儀一般采用3微米、5微米或10微米的填料粒徑,，而3微米以下粒徑的填料,，通常應(yīng)用于超高效液相色譜儀。高效液相色譜法應(yīng)用最多的是5微米粒徑的填料,。
分離單元還有另外兩個(gè)問(wèn)題需要掂量：是否需要配預(yù)柱(保護(hù)柱),、是否需要配柱溫箱。
預(yù)柱(保護(hù)柱)：預(yù)柱(保護(hù)柱)的存在,，會(huì)加大色譜死體積,，會(huì)降低柱效，所以除非樣品特別臟,、或有特別多的高分子物質(zhì)會(huì)堵塞分析柱,，否則盡量不用預(yù)柱(保護(hù)柱)。
柱溫箱：因?yàn)楦咝б合嗌V法對(duì)于溫度的些微波動(dòng)并不特別敏感,，除了一些對(duì)于柱溫穩(wěn)定性要求特別高的分離,，高效液相色譜法很多情況下并不需要配置柱溫箱,。當(dāng)然，如果采購(gòu)預(yù)算足夠多,，安裝柱溫箱確實(shí)能有更好的色譜出峰時(shí)間重復(fù)性,。
5、檢測(cè)器單元的配置選型
高效液相色譜儀的檢測(cè)器有很多種,，最常見(jiàn)的是紫外檢測(cè)器,，還有示差檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器,、二極管陣列檢測(cè)器,、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器等等。
紫外檢測(cè)器：是一種選擇性檢測(cè)器,，幾乎是所有HPLC檢測(cè)器里面價(jià)格便宜,、應(yīng)用*泛的一種檢測(cè)器，適合于測(cè)定有紫外吸收的物質(zhì)(帶苯環(huán),、雜環(huán),、雙鍵叁鍵的物質(zhì))。紫外檢測(cè)器的特點(diǎn)是靈敏度很高,、適用性很廣泛,。
示差檢測(cè)器：是一種通用型檢測(cè)器，但是它的靈敏度低于紫外檢測(cè)器,，而且它對(duì)于流速比較敏感,。示差檢測(cè)器主要用來(lái)對(duì)一些沒(méi)有紫外吸收的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，例如糖類,、高分子聚合物等等,。
熒光檢測(cè)器：僅僅適合于在紫外光照射下能發(fā)射熒光的物質(zhì)，例如維生素A,、維生素D,、黃曲霉毒素等檢測(cè)。高效液相色譜儀的熒光檢測(cè)器的特點(diǎn)是靈敏度高,、但適用范圍較窄,。
二極管陣列檢測(cè)器：是紫外檢測(cè)器的一個(gè)變種，二極管陣列檢測(cè)器的特點(diǎn)是靈敏度較紫外檢測(cè)器低,、但是能做三維圖譜，特別適合于醫(yī)藥研發(fā)類的應(yīng)用,。
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種新型的通用型檢測(cè)器,，未來(lái)的趨勢(shì)是可以替代示差檢測(cè)器等來(lái)檢測(cè)無(wú)紫外吸收的物質(zhì)，但是目前價(jià)格非常昂貴,。
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