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如果液相色譜儀出現(xiàn)峰分叉會(huì)由什么原因?qū)е碌哪兀?/h1>
液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,，對混合物進(jìn)行先分離,，而后分析鑒定的儀器。在液相色譜儀的使用過程中,，操作人員經(jīng)常會(huì)遇到色譜峰出現(xiàn)分叉的情況,。那么你知道色譜峰分叉是有幾個(gè)原因嗎？ 1色譜柱污染 相色譜儀在開始時(shí)沒問題，在使用一段時(shí)間后出現(xiàn)色譜峰分叉的問題,，可能是由于污染引起的,。這時(shí)需要對色譜柱加強(qiáng)沖洗，即使用比方法流動(dòng)相更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱,。 2保護(hù)柱失效 如果樣品基質(zhì)比較臟,，使用一段時(shí)間之后，發(fā)現(xiàn)的峰分叉或拖尾等問題,，很有可能是保護(hù)柱失效造成的,。一般粗略判斷標(biāo)準(zhǔn)，塔板數(shù),、壓力或分離度的改變超過 10%,，就需要更換保護(hù)柱了,。保護(hù)柱是消耗品,，建議直接更換，不需要再生,。 3接頭連接不正確 如果液相色譜儀色譜柱在使用過程中發(fā)現(xiàn)每個(gè)峰的峰形都出現(xiàn)問題,，先考察是否有連接問題。 管線可能太長或太短—這種情況可能導(dǎo)致滲漏或峰分叉/拖尾,。如果管線太長,，密封圈位置不當(dāng)，將發(fā)生滲漏,。如果管線推出的距離不夠,，將會(huì)產(chǎn)生一段死空間，形成混合腔,，導(dǎo)致柱外體積,，使峰形變壞。 4溶劑效應(yīng) 在反相 LC 中,， 如使用 100% 有機(jī)溶劑或 100% 強(qiáng)溶劑,，大體積進(jìn)樣時(shí)，將使液相色譜儀色譜峰過早洗脫出色譜柱,，導(dǎo)致峰變形,。如需解決這個(gè)問題可以對分析物進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，從而減少進(jìn)樣體積,?；蛘哌M(jìn)樣溶劑改為用水稀釋，與流動(dòng)相更為兼容,，即使進(jìn)樣體積較大也不會(huì)出現(xiàn)峰變形,。 較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現(xiàn)拖尾。在液相色譜中用溶于流動(dòng)相的小體積進(jìn)樣最為理想 5樣品過載 當(dāng)進(jìn)樣量超過柱子的容量,，樣品峰會(huì)呈現(xiàn)分叉或拖尾,，解決方案就是減少進(jìn)樣量,。這種問題一般在使用小體積色譜柱是表現(xiàn)更為明顯，所以色譜柱方法從常規(guī)250mm或150mm長色譜柱轉(zhuǎn)化到體積較小的快速分析柱時(shí),，進(jìn)樣量要按照柱體積的減小的比例而減小,。 6色譜柱塌陷 液相色譜儀由于柱塌陷引起的峰分叉，很難修復(fù),。如果流動(dòng)相pH>7或在色譜柱pH耐受范圍臨界點(diǎn)附近長時(shí)間使用,，是比較容易造成硅膠填料溶解塌陷。如果出現(xiàn)色譜柱塌陷,，您會(huì)看到色譜圖中的每個(gè)峰峰形都會(huì)發(fā)生變化(峰拖尾,、加寬或分叉)，短時(shí)間內(nèi)可以反方向運(yùn)行,，建議直接更換色譜柱,。 日常使用的過程中注意將溫度降低到 40 ℃以下，特別是使用高 pH 流動(dòng)相時(shí);使用高溫兼容色譜柱,，如立體保護(hù)的硅膠柱,、混合型柱、聚合物柱,、氧化鋯柱等,。使用特別適合在較高 pH 下操作的高覆蓋率或雙交聯(lián)固定相(比如，ZORBAX Extend-C18),，或使用聚合物,、混合型或氧化鋯反相柱。 7柱前篩板部分堵塞 液相色譜儀長期分析臟樣品,，如果沒有保護(hù)柱或在線柱前過濾器,，顆粒物和強(qiáng)吸附物很可能在柱入口篩板發(fā)生堵塞，同時(shí)伴隨著壓力升高,，解決辦法一般是色譜柱反沖,。1.8um粒徑的色譜柱盡量避免反沖。由于現(xiàn)在使用的是高效裝柱工藝,，不建議更換色譜柱入口篩板,，在許多色譜柱上也不可能更換。如果更換篩板,，可能影響柱效,。所以最好在色譜柱前安裝在線過濾器和保護(hù)柱。 8色譜柱性能下降 在您使用液相色譜儀色譜柱時(shí),，會(huì)用其分析各種目標(biāo)物,、使用各種流動(dòng)相并分離不同的樣品基質(zhì)，經(jīng)過長時(shí)間的使用，色譜柱會(huì)受到這些物質(zhì)的影響發(fā)生一些微妙的變化,，從而引起峰分叉,、拖尾或保留時(shí)間的改變。 在使用新色譜柱時(shí)保留其測試樣品色譜圖非常重要,，在使用一段時(shí)間后進(jìn)行比較,，就能發(fā)現(xiàn)性能上的變化。如果分離度下降導(dǎo)致不能進(jìn)行良好定量,，這根色譜柱就應(yīng)該丟棄并更換了,。
液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,，對混合物進(jìn)行先分離,，而后分析鑒定的儀器。在液相色譜儀的使用過程中,，操作人員經(jīng)常會(huì)遇到色譜峰出現(xiàn)分叉的情況,。那么你知道色譜峰分叉是有幾個(gè)原因嗎？
1色譜柱污染
相色譜儀在開始時(shí)沒問題，在使用一段時(shí)間后出現(xiàn)色譜峰分叉的問題,，可能是由于污染引起的,。這時(shí)需要對色譜柱加強(qiáng)沖洗，即使用比方法流動(dòng)相更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱,。
2保護(hù)柱失效
如果樣品基質(zhì)比較臟,，使用一段時(shí)間之后，發(fā)現(xiàn)的峰分叉或拖尾等問題,，很有可能是保護(hù)柱失效造成的,。一般粗略判斷標(biāo)準(zhǔn)，塔板數(shù),、壓力或分離度的改變超過 10%,，就需要更換保護(hù)柱了,。保護(hù)柱是消耗品,，建議直接更換，不需要再生,。
3接頭連接不正確
如果液相色譜儀色譜柱在使用過程中發(fā)現(xiàn)每個(gè)峰的峰形都出現(xiàn)問題,，先考察是否有連接問題。
管線可能太長或太短—這種情況可能導(dǎo)致滲漏或峰分叉/拖尾,。如果管線太長,，密封圈位置不當(dāng)，將發(fā)生滲漏,。如果管線推出的距離不夠,，將會(huì)產(chǎn)生一段死空間，形成混合腔,，導(dǎo)致柱外體積,，使峰形變壞。
4溶劑效應(yīng)
在反相 LC 中,， 如使用 100% 有機(jī)溶劑或 100% 強(qiáng)溶劑,，大體積進(jìn)樣時(shí)，將使液相色譜儀色譜峰過早洗脫出色譜柱,，導(dǎo)致峰變形,。如需解決這個(gè)問題可以對分析物進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，從而減少進(jìn)樣體積,?；蛘哌M(jìn)樣溶劑改為用水稀釋，與流動(dòng)相更為兼容,，即使進(jìn)樣體積較大也不會(huì)出現(xiàn)峰變形,。
較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現(xiàn)拖尾。在液相色譜中用溶于流動(dòng)相的小體積進(jìn)樣最為理想
5樣品過載
當(dāng)進(jìn)樣量超過柱子的容量,，樣品峰會(huì)呈現(xiàn)分叉或拖尾,，解決方案就是減少進(jìn)樣量,。這種問題一般在使用小體積色譜柱是表現(xiàn)更為明顯，所以色譜柱方法從常規(guī)250mm或150mm長色譜柱轉(zhuǎn)化到體積較小的快速分析柱時(shí),，進(jìn)樣量要按照柱體積的減小的比例而減小,。
6色譜柱塌陷
液相色譜儀由于柱塌陷引起的峰分叉，很難修復(fù),。如果流動(dòng)相pH>7或在色譜柱pH耐受范圍臨界點(diǎn)附近長時(shí)間使用,，是比較容易造成硅膠填料溶解塌陷。如果出現(xiàn)色譜柱塌陷,，您會(huì)看到色譜圖中的每個(gè)峰峰形都會(huì)發(fā)生變化(峰拖尾,、加寬或分叉)，短時(shí)間內(nèi)可以反方向運(yùn)行,，建議直接更換色譜柱,。
日常使用的過程中注意將溫度降低到 40 ℃以下，特別是使用高 pH 流動(dòng)相時(shí);使用高溫兼容色譜柱,，如立體保護(hù)的硅膠柱,、混合型柱、聚合物柱,、氧化鋯柱等,。使用特別適合在較高 pH 下操作的高覆蓋率或雙交聯(lián)固定相(比如，ZORBAX Extend-C18),，或使用聚合物,、混合型或氧化鋯反相柱。
7柱前篩板部分堵塞
液相色譜儀長期分析臟樣品,，如果沒有保護(hù)柱或在線柱前過濾器,，顆粒物和強(qiáng)吸附物很可能在柱入口篩板發(fā)生堵塞，同時(shí)伴隨著壓力升高,，解決辦法一般是色譜柱反沖,。1.8um粒徑的色譜柱盡量避免反沖。由于現(xiàn)在使用的是高效裝柱工藝,，不建議更換色譜柱入口篩板,，在許多色譜柱上也不可能更換。如果更換篩板,，可能影響柱效,。所以最好在色譜柱前安裝在線過濾器和保護(hù)柱。
8色譜柱性能下降
在您使用液相色譜儀色譜柱時(shí),，會(huì)用其分析各種目標(biāo)物,、使用各種流動(dòng)相并分離不同的樣品基質(zhì)，經(jīng)過長時(shí)間的使用，色譜柱會(huì)受到這些物質(zhì)的影響發(fā)生一些微妙的變化,，從而引起峰分叉,、拖尾或保留時(shí)間的改變。
在使用新色譜柱時(shí)保留其測試樣品色譜圖非常重要,，在使用一段時(shí)間后進(jìn)行比較,，就能發(fā)現(xiàn)性能上的變化。如果分離度下降導(dǎo)致不能進(jìn)行良好定量,，這根色譜柱就應(yīng)該丟棄并更換了,。