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如何控制二氧化碳培養(yǎng)箱無污染

閱讀:1879      發(fā)布時間:2015-8-11
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 二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境如穩(wěn)定的溫度(37°C),、穩(wěn)定的CO2水平(5%),、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對濕度(95%),,來對細胞/組織進行體外培養(yǎng)的一種裝置,。 廣泛應(yīng)用于細胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng),,常見于細胞動力學研究,、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理,、化學因素的致癌或毒理效應(yīng),、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體,、體外授精(IVF),、干細胞、組織工程,、藥物篩選等研究領(lǐng)域,。 

 在生物活體內(nèi),生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護細胞或組織,,但是在體外培養(yǎng)時,,沒有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度,、CO2 和濕度,,大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿足研究實驗的需要。然而,,針對培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源,,各品牌二氧培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同,因此細胞體外培養(yǎng)中zui大的威脅實際上是污染問題,。 

 二氧化碳培養(yǎng)箱中的主要污染源:細菌,、真菌(霉菌和酵母菌),、病毒、支原體,、非同種細胞,。 

      對于細胞來說,非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存,,培養(yǎng)箱本身是不會辨別的,,而細胞培養(yǎng)中大部分時間里細胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi),因此箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵,! 

      細菌:細菌污染后,,培養(yǎng)基1-2天就會變色,對細胞生長影響明顯,,應(yīng)迅速將污染細胞與其它細胞系隔離,,滅菌后丟棄,還要用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,。 

      病毒:由于病毒寄生生存,,爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離,丟棄處理,,相對來說容易處理,,對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),,但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。因此,潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題,。

真菌(霉菌和酵母菌):真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),,但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,;目前沒有好的抑制方法,包括現(xiàn)在常用的兩性霉素,,一旦污染容易反復爆發(fā),,尤其孢子很難殺滅。 

支原體:支原體污染后,,因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細胞無明顯變化,,外觀上給人以正常感覺,,實則細胞已經(jīng)受到多方面潛在影響,如引起細胞變形,影響DNA合成,,抑制細胞生長等,,往往被大多數(shù)實驗者忽視,。 

非同種細胞:即細胞交叉污染,,由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染,。目前,,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效,。

因此,,以上污染一旦發(fā)生,細胞zui后基本只能丟棄,,實驗無法挽救,,對于許多取樣困難的實驗損失無法估量! 

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