生化培養(yǎng)箱廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域,，其中zui常使用的兩種方法是多管發(fā)酵法與濾膜法，下面我們介紹一下在這兩種應(yīng)用中有哪些注意事項,。
1.培養(yǎng)溫度的要求 總大腸菌群中的細(xì)菌除生活在腸道中外,，在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在,，但此等在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養(yǎng)的zui合適溫度為25℃左右，如在37℃培養(yǎng)則仍可生長,，但如將生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)溫度再升高至44.5℃,，則不再生長，而直接來自糞便的大腸菌群細(xì)菌,，習(xí)慣于37℃左右生長,，如將生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)溫度升高至44.5℃仍可繼續(xù)生長。因此,，可用提生化培養(yǎng)箱高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分,，兩種方法也都基于此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培養(yǎng)基放入生化培養(yǎng)箱時,，生化培養(yǎng)箱箱內(nèi)溫度一定要達到所要求的溫度(44.5±0.5℃)時,，方可放入。如用恒溫水浴箱時,，其水面要高于接種物面,，放濾膜的培養(yǎng)皿要沉到水浴箱底部。
2.加氯水樣的處理 經(jīng)氯處理消毒過的水樣,，水中含有一定量的余氯,，使大腸菌群處于受損或受抑制狀態(tài)，在采集水樣時應(yīng)提前在生化培養(yǎng)箱采樣瓶中加硫代硫酸鈉,，硫代硫酸鈉可以脫氯,，使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修復(fù)，從而避免出現(xiàn)計數(shù)結(jié)果偏低甚至假陰性的現(xiàn)象,。此外余氯對濾膜法培養(yǎng)的細(xì)菌其抑制作用尤為明顯,，所以抽濾時應(yīng)對水樣進行大量無菌水稀釋，以減少余氯的殘留,。
3.樣品的保存生化培養(yǎng)箱采樣用的容器使用前應(yīng)蓋好瓶蓋,，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置干燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h,，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min,。采樣后水樣的正確保存也很重要，如保存不當(dāng)可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌死亡或在一定條件下再生長,，這些都將影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。檢測室接到水樣后，應(yīng)立即檢測,，如因故不能檢測時,，應(yīng)立即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時內(nèi)檢測。
4.培養(yǎng)物質(zhì)的制備與保存
⑴.多管發(fā)酵法所使用的培養(yǎng)液在分裝于各生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管中后，應(yīng)將發(fā)酵管盡快放于高壓蒸汽滅菌器中,，在115℃滅菌20min(注意：這個溫度也應(yīng)控制好,，既達到滅菌的作用，還要防止培養(yǎng)物質(zhì)分解流失),，然后貯存于冰箱或暗處備用,。
⑵.濾膜法所采用的m-fc培養(yǎng)基多使用外購的成品，培養(yǎng)基中苯胺藍的純度和質(zhì)量往往影響菌落的顏色,，因此,，無菌包裝的成套培養(yǎng)基在使用前，先接種典型糞大腸菌,，以觀察對比菌落的顏色,，來鑒定其穩(wěn)定性。
5.結(jié)果統(tǒng)計
⑴.多管發(fā)酵法的結(jié)果是根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目,，從mpn表中查得相應(yīng)的mpn指數(shù),，來計算每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的mpn值。mpn是“most probable number"的縮寫,，指zui大可能數(shù),，它是根據(jù)統(tǒng)計學(xué)理論，估計水體中的菌群密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法,，所以準(zhǔn)確判斷不同接種量發(fā)酵管的陽性數(shù)是非常重要的,，否則將導(dǎo)致較大偏差。
⑵.濾膜法的結(jié)果是計數(shù)濾膜上呈藍或藍綠色的菌落,，來計算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所以為便于計數(shù),，減少誤差,，理想的水樣體積是一片濾膜上生長20-60個糞大腸菌群菌落。
多管發(fā)酵法與濾膜法是生化培養(yǎng)箱在使用中zui常用到的,，掌握這些注意事項可以讓我們在使用中減少錯誤的發(fā)生,。
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