培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長(zhǎng)和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,，因此對(duì)于微生物檢驗(yàn)而言,，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制尤為重要。培養(yǎng)基的主要作用有兩方面：①提供微生物生長(zhǎng)所需的營養(yǎng)物質(zhì),；②培養(yǎng)基具有選擇性和差異性，可以選擇特定類型的細(xì)菌或真菌進(jìn)行培養(yǎng),，并區(qū)分不同種類的微生物,。因此，在微生物檢驗(yàn)中,，必須對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，只有優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基才能為微生物檢驗(yàn)提供精準(zhǔn)、可靠的檢測(cè)結(jié)果。
培養(yǎng)基的概述
培養(yǎng)基是用于保證微生物繁殖,、鑒定,、保持活力的物質(zhì)，按照物理性質(zhì)可以分成液體培養(yǎng)基,、固體培養(yǎng)基,、半固體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基，按照化學(xué)性質(zhì)可以分成天然培養(yǎng)基,、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基,，按照功能可以分成選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基,。不同培養(yǎng)基要求不同,，保存方式也不同。在受熱,、吸潮后,，培養(yǎng)基極易被微生物污染或分解變質(zhì)，需在避光,、防潮,、陰涼處儲(chǔ)存。
培養(yǎng)基的采購驗(yàn)收
微生物檢驗(yàn)需使用大量培養(yǎng)基,。為提高檢驗(yàn)效率,，實(shí)驗(yàn)室多使用商品化即用型培養(yǎng)基、商品化脫水合成培養(yǎng)基,。在培養(yǎng)基的采購中,，應(yīng)選擇國內(nèi)、外商家的產(chǎn)品,，并向生產(chǎn)企業(yè)索要培養(yǎng)基成分名稱,、產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào),、最終 pH值,、儲(chǔ)存條件、生產(chǎn)日期,、有效期,、質(zhì)控報(bào)告和必要的相關(guān)信息，以保證培養(yǎng)基的質(zhì)量,。在產(chǎn)品交貨驗(yàn)收時(shí),，購買者需對(duì)產(chǎn)品包裝的完整性、生產(chǎn)日期,、有效期和產(chǎn)品合格證明等進(jìn)行核驗(yàn),，檢查培養(yǎng)基的顏色,、性質(zhì)等是否符合實(shí)驗(yàn)室相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基檢驗(yàn)合格后進(jìn)行入庫登記,。
培養(yǎng)基的制備
配制要求：正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗(yàn)的基礎(chǔ),。實(shí)驗(yàn)人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時(shí)，要嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明進(jìn)行配制,，并做好配制記錄,。在配制過程中，實(shí)驗(yàn)人員需要嚴(yán)格遵守相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn),，佩戴口罩進(jìn)行操作,，避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末，稱量,、溶解應(yīng)使用專門的角匙,，不使用金屬制品，避免金屬離子混入培養(yǎng)基,，影響微生物生長(zhǎng),；準(zhǔn)確稱量后，應(yīng)先加入適量的水充分溶解,，再加水至所需量進(jìn)行加熱,，加熱中應(yīng)不斷攪拌，防止培養(yǎng)基在容器底部積聚,；調(diào)節(jié)pH值,，分裝到比培養(yǎng)基體積最少大 20%的容器中，按說明要求進(jìn)行滅菌,。粉末狀態(tài)的培養(yǎng)基開封后應(yīng)存放在陰涼干燥處,，及時(shí)使用，環(huán)境濕度過大會(huì)使培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮,、結(jié)塊,、污染等情況。對(duì)于瓊脂類培養(yǎng)基,，可采用沸水浴或流動(dòng)蒸汽的加熱方式進(jìn)行融化,，但反復(fù)凍融只允許進(jìn)行1次。
配制用水：水是配制培養(yǎng)基的一部分,，一般使用純化水,。還應(yīng)定期檢查培養(yǎng)基配制用水的微生物污染情況，應(yīng)符合純化水要求,。
滅菌：滅菌能確保培養(yǎng)基質(zhì)量達(dá)標(biāo),，實(shí)驗(yàn)室常采用濕熱滅菌法，培養(yǎng)基應(yīng)按照產(chǎn)品使用說明要求進(jìn)行滅菌,，每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡,，驗(yàn)證滅菌效果。一些培養(yǎng)基可以通過煮沸的方式進(jìn)行滅菌,，如結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基,、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)將培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出,，盡快冷卻至所需溫度,，防止加熱過度，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成影響,；要檢查培養(yǎng)基的pH值,、色澤、均勻度等指標(biāo),，確保符合要求后貼上標(biāo)簽,，標(biāo)明名稱、日期,、效期等基本信息,。
制備：制備平板時(shí)，將滅菌后的培養(yǎng)基傾注于滅菌過的干燥平皿中,，在平皿中形成至少3mm的厚度,，直徑90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的瓊脂培養(yǎng)基，需要保存或培養(yǎng)超過48h的培養(yǎng)基應(yīng)傾注更多培養(yǎng)基 ,。培養(yǎng)基冷卻凝固后應(yīng)立即使用或儲(chǔ)存,，儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)標(biāo)記好培養(yǎng)基名稱及制備日期，密封后放置在2～8℃冰箱中,。制備斜面培養(yǎng)基時(shí),，應(yīng)先將培養(yǎng)基分裝到試管中，通常每管加入10mL培養(yǎng)基,，高壓滅菌,，在培養(yǎng)基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置，待冷卻凝固后方能使用和保存,。對(duì)于液體培養(yǎng)基,，根據(jù)使用要求直接分裝至三角瓶或試管中，滅菌,，冷卻至室溫直接使用或保存,。
培養(yǎng)基的儲(chǔ)存
驗(yàn)收入庫的培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按照生產(chǎn)廠家標(biāo)明的儲(chǔ)存條件、保存期限,、使用方法保存和使用,。開封后的商品化脫水合成培養(yǎng)基要放置在密閉容器中保存，在瓶身注明第一次開封日期 ,。實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基應(yīng)避光,、干燥保存,，需冷藏的培養(yǎng)基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存時(shí)間通常為2～4 周,，瓶裝及試管裝培養(yǎng)基保存時(shí)間一般為3～6個(gè)月,，具體效期應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。每次使用培養(yǎng)基前,，要觀察顏色變化,、流動(dòng)性、均勻性,、是否結(jié)塊和是否污染等情況,。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊,、其他性狀明顯改變的情況,，應(yīng)停止使用。
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