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中國南方普遍發(fā)生的高溫又使這一疾病受到更多重動物模型是研究疾病的有力工具，國內(nèi)針對大鼠熱應(yīng)激模型的制作方法和程序的報道很少,，而以其為檢測工具的報道很多,，而且控制條件和方法不盡相同，冷雪等選用180~200g雄性Wistar大鼠,，溫度38℃,，相對濕度80%，熱攻擊1h,，最終以肛溫,、心電圖等評價；高峰等“選用SD大鼠,，溫度44℃,，熱攻擊2h,，最后檢測血清GSH-Px、MDA,、IL-2等活性或含量鑒定：陳琦等亦選用SD大鼠,，溫度41℃，相對濕度60%,，熱攻擊2h,，最后根據(jù)行為變化和肝臟Hsp70表達(dá)量鑒定。

以上報道的大鼠熱應(yīng)激模型制作手段和評價方法差異較大,，娜琴等認(rèn)為應(yīng)激動物模型尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),，建議評價指標(biāo)為行為學(xué)變化和實驗室相關(guān)檢測指標(biāo)，并認(rèn)為Hsp70變化是主因,。本研究模擬熱應(yīng)激自然發(fā)生的因素,，結(jié)合前人經(jīng)驗以及大鼠自身的生理特點，試圖建立比較合理的大鼠熱應(yīng)激模型,，以行為變化,、剖檢變化、血清酶活性,、抗氧化指標(biāo)和肝臟Hsp70表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗證,，本期為大鼠熱應(yīng)激模型標(biāo)準(zhǔn)化建立、體溫調(diào)究,、節(jié)相研關(guān)熱性病的預(yù)防和治療提供參考,。

材料與方法

材料

實驗動物SD大鼠20只，雄性,，清潔級,，體(205g*60)g，2009-0004J,，按照國家實驗動物環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)(GB14925-2010)◎養(yǎng),。.L.1.2試及設(shè)備Na離子試盒、K*離子試劑盒,、白白試劑盒,、總蛋白試制盒，堿性磷酸試制盒,、谷丙轉(zhuǎn)氨試劑盒,、肌酸請酸肌試劑盒、乳脫氫試劑盒,、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒,、再二試劑盒、超氧化物線化酶測試盤。霉菌培養(yǎng)箱,。pH530型pH測定儀

方法

精智分組及模型復(fù)制SD大鼠隨機(jī)分為兩組，組為一對照組,，二組為模型組,。一組在22℃屏障系境統(tǒng)內(nèi)正常飼環(huán)養(yǎng)，二組參考部分文獻(xiàn)*氣*,，模,，置霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)升溫飼養(yǎng)，溫度為40℃,，濕度為50%,，2h后自霉菌培養(yǎng)箱取出，行為評價后眼底靜脈叢采血,，分離血清后檢測相關(guān)指標(biāo),。

生理生化指標(biāo)測定血清[K]、血清[Na],、血清總蛋白(TP),、血清白蛋白(ALB)、血紅蛋白(HB),、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT),、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(ALP),、肌酸磷酸肌酶(CK),、乳酸脫氫酶(LDH)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的測定，均按試劑盒說明書進(jìn)行,。

肝臟HSP70表達(dá)量測定用裂解液處理2.0g肝臟組織塊,，常規(guī)方法提取總蛋白，BCA法測蛋白濃度,，用10%的SDS-PAGE以70V/120V恒定電壓電泳,，電泳結(jié)束轉(zhuǎn)至PVDF膜，TBST37℃封閉1h,，先后加入HSP70兔抗鼠多克隆抗體和GAPDH鼠抗單克隆抗體,，4℃孵育12h；HSP70經(jīng)過TBST洗滌后加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG,，37℃孵育1h,，TBST再次洗滌，ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯影檢測：GAPDH4℃孵育后直接以ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯影檢測,。HSP70相對含量以HSP70/GAPDH灰度比值表示,。