中國南方普遍發(fā)生的高溫又使這一疾病受到更多重動物模型是研究疾病的有力工具,，國內(nèi)針對大鼠熱應(yīng)激模型的制作方法和程序的報(bào)道很少,，而以其為檢測工具的報(bào)道很多，而且控制條件和方法不盡相同,，冷雪等選用180~200g雄性Wistar大鼠,，溫度38℃，相對濕度80%,，熱攻擊1h,，最終以肛溫、心電圖等評價(jià),；高峰等“選用SD大鼠,，溫度44℃，熱攻擊2h,，最后檢測血清GSH-Px,、MDA、IL-2等活性或含量鑒定：陳琦等亦選用SD大鼠,，溫度41℃,，相對濕度60%，熱攻擊2h,，最后根據(jù)行為變化和肝臟Hsp70表達(dá)量鑒定,。
以上報(bào)道的大鼠熱應(yīng)激模型制作手段和評價(jià)方法差異較大，娜琴等認(rèn)為應(yīng)激動物模型尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),，建議評價(jià)指標(biāo)為行為學(xué)變化和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢測指標(biāo),，并認(rèn)為Hsp70變化是主因。本研究模擬熱應(yīng)激自然發(fā)生的因素，結(jié)合前人經(jīng)驗(yàn)以及大鼠自身的生理特點(diǎn),，試圖建立比較合理的大鼠熱應(yīng)激模型,，以行為變化、剖檢變化,、血清酶活性,、抗氧化指標(biāo)和肝臟Hsp70表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證，本期為大鼠熱應(yīng)激模型標(biāo)準(zhǔn)化建立,、體溫調(diào)究,、節(jié)相研關(guān)熱性病的預(yù)防和治療提供參考。
材料與方法
材料
實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠20只,，雄性,，清潔級，體(205g*60)g,，2009-0004J,，按照國家實(shí)驗(yàn)動物環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)(GB14925-2010)◎養(yǎng)。.L.1.2試及設(shè)備Na離子試盒,、K*離子試劑盒,、白白試劑盒、總蛋白試制盒,，堿性磷酸試制盒,、谷丙轉(zhuǎn)氨試劑盒、肌酸請酸肌試劑盒,、乳脫氫試劑盒,、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、再二試劑盒,、超氧化物線化酶測試盤,。霉菌培養(yǎng)箱。pH530型pH測定儀
方法
精智分組及模型復(fù)制SD大鼠隨機(jī)分為兩組,，組為一對照組，二組為模型組,。一組在22℃屏障系境統(tǒng)內(nèi)正常飼環(huán)養(yǎng),，二組參考部分文獻(xiàn)*氣*，模,，置霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)升溫飼養(yǎng),，溫度為40℃，濕度為50%,，2h后自霉菌培養(yǎng)箱取出,，行為評價(jià)后眼底靜脈叢采血，分離血清后檢測相關(guān)指標(biāo)。
生理生化指標(biāo)測定血清[K],、血清[Na],、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB),、血紅蛋白(HB),、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT),、堿性磷酸酶(ALP),、肌酸磷酸肌酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的測定,，均按試劑盒說明書進(jìn)行,。
肝臟HSP70表達(dá)量測定用裂解液處理2.0g肝臟組織塊，常規(guī)方法提取總蛋白,，BCA法測蛋白濃度,，用10%的SDS-PAGE以70V/120V恒定電壓電泳，電泳結(jié)束轉(zhuǎn)至PVDF膜,，TBST37℃封閉1h,，先后加入HSP70兔抗鼠多克隆抗體和GAPDH鼠抗單克隆抗體，4℃孵育12h,；HSP70經(jīng)過TBST洗滌后加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG,，37℃孵育1h，TBST再次洗滌,，ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯影檢測：GAPDH4℃孵育后直接以ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯影檢測,。HSP70相對含量以HSP70/GAPDH灰度比值表示。
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