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實驗材料

二氧化碳培養(yǎng)箱,、液氮罐、超低溫低溫冰箱,、電熱恒溫水浴鍋,、離心機等。

培養(yǎng)皿,、滴瓶,、吸管、離心管,、燒杯,、量筒、三角瓶,、培養(yǎng)瓶等

下面喆圖小編給大家說下簡易的實驗步驟

將凍存細胞從液氮中取出后,，在37℃電熱恒溫水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中,，加入10ml預熱的DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹勻，離心2min,，棄上清液,。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液,。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹打，接種于10cm盤中,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

 細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶,，放入二氧化碳培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,，轉(zhuǎn)移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,，轉(zhuǎn)移至15ml離心管離心2min，棄上清液,。再加入10ml PBS（經(jīng)滅菌,，保存于40℃）吸取10微升進行計數(shù)，按照1×105/盤接種,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

   加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO）,，放入凍存盒內(nèi),，立即放入一80℃超低溫冰箱內(nèi)，過夜,，第二天放入液氮中,，可以保存至少兩年，如不放入可以保存90天,。