羊水中含有胎兒脫落的上皮細(xì)胞,，可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型,。目前國(guó)內(nèi)外大都采用腹腔羊膜穿刺術(shù)，妊娠12-30周的羊水細(xì)胞均可培養(yǎng)成功,。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析,，最佳孕周為16周左右。因此時(shí)羊水增長(zhǎng)快,，羊水中細(xì)胞較多,， 細(xì)胞培養(yǎng) 易于生長(zhǎng)，而且不易損傷胎兒,。國(guó)內(nèi)多數(shù)選擇的穿刺時(shí)間在妊娠的第16-30周,。國(guó)外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B超下定位及穿刺,。羊水量按妊娠時(shí)間大致計(jì)算（1ml/w）,。資料表明，穿刺病例的妊娠結(jié)局,、分娩方式,、胎兒的出生體重等與未穿刺無(wú)明顯差異。
1,、實(shí)驗(yàn)材料
2,5%碘酒,、75%酒精、無(wú)菌棉簽和棉球,、鑷子,、20-22號(hào)無(wú)菌腰穿針,、吸管、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)液（PRMI 1640,、199、F10,、F12）,、小牛血清、秋水仙素,、KCL,、甲醇、冰醋酸,、培養(yǎng)皿,、蓋玻片等。
2,、培養(yǎng)液配制
F-12 85%
小牛血清 15%
雙抗 100u/ml
小瓶貯藏 4-8℃
3,、操作過程
A（蓋玻片培養(yǎng)法）
（1）采樣：選擇妊娠13-14周婦女，在無(wú)菌條件下抽取羊水5ml,，立即注入無(wú)菌離心管中,；（2）收集：離心分離細(xì)胞，1000rpm10分鐘,，去上清,，留0.5ml，輕打混勻,；（3）接種：30mm培養(yǎng)皿中放蓋玻片1張,，每片滴混勻的細(xì)胞液1-2滴，置二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30-60分鐘,；（4）培養(yǎng)：取出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml,，靜置培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞生殖狀況并定時(shí)換液，5-10天后,，可見大量成纖維細(xì)胞或上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng),；（5）終止培養(yǎng)：當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,，作用10-12小時(shí),；（6）低滲：倒掉培養(yǎng)液，加預(yù)溫37℃0.075MKCL溶液5ml,，37℃溫育30分鐘,，鏡下可見脹大的羊水細(xì)胞，加0.5-1ml 3∶1甲醇：冰醋酸固定液預(yù)固定,；（7）固定：倒掉低滲液,，加5ml固定液固定30分鐘以上,，反復(fù)3次；（8）干燥：將附有細(xì)胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)皿中,，置80℃烤箱處理2-3小時(shí),；（9）膠片：將附有細(xì)胞的蓋玻片用樹脂膠封固于玻片上，正面朝外,，小心細(xì)胞破壞,；
B（常規(guī)培養(yǎng)法）
（1）—（2）相同于蓋玻片培養(yǎng)法；（3）接種：將混勻的羊水細(xì)胞種置于50ml或100ml 細(xì)胞培養(yǎng) 瓶?jī)?nèi),，平均10ml羊水細(xì)胞收集的細(xì)胞種置一瓶加5-10ml混合培養(yǎng)液,。（4）培養(yǎng)：酒精燈火先封口，靜置培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞貼臂及生長(zhǎng)情況,，5-10天后可見瓶底面有大量羊水細(xì)胞生長(zhǎng),；（5）終止培養(yǎng)：同A法；（6）細(xì)胞收集：將培養(yǎng)液倒入一干凈離心管中,，加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶，輕輕搖動(dòng),，使培養(yǎng)瓶底面*接觸消化酶,，然后用彎頭吸管吹打，待細(xì)胞全部脫落后加前培養(yǎng)液終止胰蛋白酶消化,。用吸管移細(xì)胞懸液于離心管中,。1000-2000rpm10分鐘，棄上清,，留細(xì)胞沉慮,。若一次消化不*，可反復(fù)消化,；（7）低滲及預(yù)固定：加預(yù)溫37℃KCL溶液10ml,，37℃溫育30分鐘，加0.5-1ml新鮮配制的3∶1甲醇冰乙酸固定液預(yù)固定,，用氣泡吹打細(xì)胞使其混勻,。（8）固定：用新鮮配制的3∶2甲冰固定三次，每次30分鐘,。固定液加入時(shí)沿管壁緩慢加入,；（9）制片及干燥：用絨毛制片；
（10）分帶處理,。
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