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       實(shí)驗(yàn)器材       

       二氧化碳培養(yǎng)箱、液氮罐,、超低溫低溫冰箱,、電熱恒溫水浴鍋、離心機(jī)等,。

       培養(yǎng)皿,、滴瓶、吸管,、離心管,、燒杯、量筒,、三角瓶,、培養(yǎng)瓶等

       下面喆圖小編給大家說(shuō)下簡(jiǎn)易的實(shí)驗(yàn)步驟

       將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃電熱恒溫水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化,。移入15ml離心管中,，加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心2min,，棄上清液,。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液,。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹打，接種于10cm盤中,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

       細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶,，放入二氧化碳培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,，轉(zhuǎn)移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管離心2min,，棄上清液,。再加入10ml PBS（經(jīng)滅菌，保存于40℃）吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù),，按照1×105/盤接種,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

       加入1ml凍存液（90%血清,，10%DMSO）,，放入凍存盒內(nèi)，立即放入一80℃超低溫冰箱內(nèi),，過夜,，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年,，如不放入可以保存90天,。

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