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       實驗器材       

       二氧化碳培養(yǎng)箱、液氮罐,、超低溫低溫冰箱,、電熱恒溫水浴鍋、離心機等,。

       培養(yǎng)皿,、滴瓶、吸管,、離心管,、燒杯、量筒,、三角瓶,、培養(yǎng)瓶等

       下面喆圖小編給大家說下簡易的實驗步驟

       將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃電熱恒溫水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化,。移入15ml離心管中,，加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹勻,，離心2min,，棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗,，棄上清液。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹打,，接種于10cm盤中,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

       細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時．去培養(yǎng)基,，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入二氧化碳培養(yǎng)箱3min,。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤,，轉(zhuǎn)移至15ml離心管離心2min,，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)滅菌,，保存于40℃）吸取10微升進行計數(shù),，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

       加入1ml凍存液（90%血清,，10%DMSO），放入凍存盒內(nèi),，立即放入一80℃超低溫冰箱內(nèi),，過夜，第二天放入液氮中,，可以保存至少兩年,，如不放入可以保存90天。

       以上就是本篇的全部內(nèi)容了,，如需了解更多技術(shù)知識,，歡迎聯(lián)系上海喆圖科學(xué)儀器有限公司