實(shí)驗(yàn)器材
二氧化碳培養(yǎng)箱、液氮罐,、超低溫低溫冰箱,、電熱恒溫水浴鍋、離心機(jī)等,。
培養(yǎng)皿,、滴瓶、吸管,、離心管,、燒杯、量筒,、三角瓶,、培養(yǎng)瓶等
下面喆圖小編給大家說(shuō)下簡(jiǎn)易的實(shí)驗(yàn)步驟
將凍存細(xì)胞從液氮中取出后,在37℃電熱恒溫水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化,。移入15ml離心管中,,加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基,輕輕吹勻,離心2min,,棄上清液,。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗,棄上清液,。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基,,輕輕吹打,接種于10cm盤中,,在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí).去培養(yǎng)基,10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,,放入二氧化碳培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,,轉(zhuǎn)移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤,轉(zhuǎn)移至15ml離心管離心2min,,棄上清液,。再加入10ml PBS(經(jīng)滅菌,保存于40℃)吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù),,按照1×105/盤接種,,在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
加入1ml凍存液(90%血清,,10%DMSO),,放入凍存盒內(nèi),立即放入一80℃超低溫冰箱內(nèi),,過夜,,第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,,如不放入可以保存90天,。
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