實驗方法原理
HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子,，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落,。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導(dǎo)劑，經(jīng)二甲基亞砜處理后的HL-60細胞按粒系途徑定向成熟分化,，同時細胞的增殖力降低,，幾乎全部細胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此,，這種方法可用于細胞分化的基礎(chǔ)研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面,。
實驗材料 HL-60細胞
試劑、試劑盒 小牛血清,、RPMI1640培養(yǎng)液,、臺盼蘭、瓊脂,、二甲基亞砜
儀器,、耗材 超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱,、顯微鏡,、培養(yǎng)瓶、吸管,、酒精燈,、血細胞計數(shù)板、多孔培養(yǎng)板
實驗步驟
1. 收集對數(shù)生長期的HL-60細胞,，先按實驗十三測定細胞活力,，然后調(diào)整細胞濃度，制成300~1 000活細胞/ml 的細胞懸液,。
2. 取二個培養(yǎng)瓶每個瓶中加9 ml 調(diào)整好濃度的細胞懸液,，然后各加入1 ml 3%瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入,，混勻,。
3. 用微量加樣器吸140 μl 二甲基亞砜（MDSO），加到一個瓶中,，充分混勻,，為實驗組，另一瓶不加DMSO,，為空白對照組,。
4. 取一個16 mm 多孔培養(yǎng)板，每孔加1 ml（35 mm 培養(yǎng)皿需加2 ml）細胞瓊脂懸液,，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好,，蓋上蓋并作好標記,。
5. 在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。
6. 然后移培養(yǎng)板或平皿于二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃進行培養(yǎng),。
7. 培養(yǎng)7~10天,，肉眼觀察并計數(shù)細胞集落。
8. 結(jié)果：以肉眼可見的細胞團（含500個以上細胞）作為計數(shù)集落的標準,。對照組HL-60細胞在含0.3%的軟瓊脂培養(yǎng)基中生長良好,，每個孔中可見有多個集落形成，而實驗組HL-60細胞因經(jīng)二甲基亞砜誘導(dǎo)分化,，細胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少,。
9. 集落的計數(shù)和計算：
（1）集落數(shù)=n孔中細胞集落數(shù)總和/n孔
（2）集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細胞總數(shù)×100%
20
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)