避免污染
哺乳動物細胞是在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的,溫度有利于幾乎任何微生物的生長,,無論是想要的還是不需要的,。盡管許多研究人員在他們的培養(yǎng)基中使用抗生素和抗真菌劑作為預防污染的措施,但這并不能解決持續(xù)的方法學錯誤,,并常常隱藏了存在問題的事實,。如果可能的話,避免使用這些制劑,,并努力改進您的無菌技術并開發(fā)一個系統(tǒng)來保持您的二氧化碳培養(yǎng)箱清潔,。
培養(yǎng)箱污染的主要來源是微生物通過檢測門進入。這可能是顯而易見的,,但將它放在**要位置將有助于您發(fā)展防止全面污染的長期習慣,。在培養(yǎng)箱中放置物品時應戴手套,并盡量減少內部玻璃門打開的時間,。偶爾用70%乙醇擦拭門把手,。每周更換一次,保持濕度盤中的水清潔,。定期用肥皂和水擦洗鍋,,然后用乙醇擦拭; 或者,高壓滅菌鍋,。如果培養(yǎng)基溢出二氧化碳培養(yǎng)箱內,,請取出擱板并*清潔。
這些清潔儀式的頻率將取決于您培養(yǎng)箱獲得的流量,。大型實驗室中的培養(yǎng)箱可能需要更頻繁的清潔,。如果你從一個干凈的培養(yǎng)箱開始,并且注意進出的東西,,它應該保持清潔數(shù)周或數(shù)月,。
確保二氧化碳水平是應該的
大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),。二氧化碳是這個緩沖系統(tǒng)的重要組成部分,保持在5%以維持介質在生理pH值,。雖然基本上所有的現(xiàn)代化培養(yǎng)箱都配備了CO2傳感器以保持所需的CO2水平,,但隨著時間的推移,校準可能會偏離設定值,,需要操作員直接確定CO2水平時進行偏置重新校準,。
測量培養(yǎng)箱中CO2水平最準確的方法是使用氣體分析儀,氣體分析儀的操作基于待測氣體的化學吸收之后的流體的體積膨脹,。該設備使用室內空氣(0.04%CO2)“歸零”,,培養(yǎng)箱中的空氣通過門或孵化器側的端口進行采樣。
較舊的模型培養(yǎng)箱可能需要更頻繁的重新校準,。新型號每個月執(zhí)行一次CO2傳感器的自動重新清零,。雖然這些模型很少需要手動重新校準,但用戶仍應按照其標準操作程序的規(guī)定,,檢查腔室二氧化碳水平,。
保持37°C的溫度
在我們的身體努力保持核心溫度37°C的情況下,在這種溫度下培養(yǎng)的哺乳動物細胞是幸福的,,這并不奇怪,。大多數(shù)二氧化碳培養(yǎng)箱都配備了顯示內腔溫度的顯示屏,但定期仔細檢查一下是個不錯的主意,,特別是當您注意到細胞生長不理想或不常見時,。打開外部和內部的培養(yǎng)箱門,并將溫度計帶到玻璃門的內部,,以便在玻璃門關閉時從外部讀取溫度,。在你離開實驗室前**做這件事。第二天早上,,打開培養(yǎng)箱的外門并讀取溫度計,。再一次,如果讀數(shù)不同于37°C(并且溫度計準確),,則需要重新校準板載溫度傳感器,。
保持潮濕
您的培養(yǎng)箱內部保持在相對較高的溫度下,因此培養(yǎng)基的蒸發(fā)在沒有高濕度的情況下會成為一個真正的問題,。通過將水保持在培養(yǎng)箱底部的托盤中,,保持培養(yǎng)箱內相對濕度較高(90%**95%)。其缺點是充水盤是潛在的污染源,。
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