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  首先做實驗所需儀器耗材如下：
    二氧化碳培養(yǎng)箱、液氮罐,、超低溫低溫冰箱,、電熱恒溫水浴鍋、離心機等,。

   培養(yǎng)皿,、滴瓶、吸管,、離心管,、燒杯、量筒,、三角瓶,、培養(yǎng)瓶等

下面小編給大家說下簡易的實驗步驟

    將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃電熱恒溫水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化,。移入15ml離心管中,，加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹勻,，離心2min,，棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗,，棄上清液,。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打,，接種于10cm盤中,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

     細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基,，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入二氧化碳培養(yǎng)箱3min,。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,，轉(zhuǎn)移至15ml離心管,。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管離心2min,，棄上清液,。再加入10ml PBS（經(jīng)滅菌，保存于40℃）吸取10微升進行計數(shù),，按照1×105/盤接種,，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

       加入1ml凍存液（90%血清,，10%DMSO）,，放入凍存盒內(nèi)，立即放入一80℃超低溫冰箱內(nèi),，過夜,，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年,，如不放入可以保存90天,。