巨噬細胞是動物機體內(nèi)重要的免疫細胞,， 具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等重要作用， 被廣泛應(yīng)用于體外免疫增強藥物的非特異性免疫功能,。有很多能從多種組織和器官中分離純化巨噬細胞,，但這些方法大多都是繁瑣、復(fù)雜,，所需時間長且耗資較大,。本實驗就以小白鼠腹腔巨噬細胞為研究對象， 探索建立一種巨噬細胞體外分離培養(yǎng)與鑒定簡便的方法,。
首先選取一只小白鼠,，腹腔注射不含小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液5ml。輕柔小鼠腹部2-3min，靜置5-7min后將小鼠頸椎脫臼處死,，至于解剖板上,，無菌條件下打開腹腔，用注射器抽取腹腔液,，離心5min （1000r/min）,，棄上清，用pbs洗滌2遍,。再用含10%成牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液（0.1%雙抗溶液）調(diào)節(jié)至2×106ml-1,，接種于培養(yǎng)瓶及6孔板，置5%的CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)2h,，棄上清,。用不含小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液洗滌2遍，然后加含有10%小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液在37℃,，CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。
巨噬細胞的觀察與鑒定
然后稱取4g臺盼藍,，加少量蒸餾水研磨,，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾,，4度保存,。使用時。用pbs稀釋至0.4%,。,； 胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液,，并作適當(dāng)稀釋,。染色：細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9：1混合混勻；
在三分鐘內(nèi),，分別計數(shù)活細胞和死細胞,。鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色,，而活細胞拒染呈無色透明狀,。
瑞氏染色計算細胞純度
細胞涂片自然干燥后，用蠟筆在兩端畫線,，以防染色時染液外溢,。隨后將玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴,，使其蓋滿涂片,，大約1分鐘后,，滴加等量的染液，用吸耳球輕輕混勻,。沖洗：染色5-10分鐘用流水染液,，待干， 結(jié)果觀察,，將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察,。
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