今天小編帶大家了解一下植物組織培養(yǎng)的過程:
首先根據(jù)所配培養(yǎng)基的要求,從各母液只能感取出大量元素,、微量元素,、鐵液、維生素,、激素,、蔗糖等,置于容量瓶中定容至100ml,,稱取瓊脂加入400ml置于大燒杯中加熱時不斷攪拌,,十分鐘后瓊脂溶解,呈透明狀即可,,放置稍涼,。
然后溶解好的瓊脂溶液中加入前面所取出的各物質(zhì)及糧溶液100ml,不斷攪拌使培養(yǎng)基混合均勻,。
用PH計或試紙測PH值,,用INNaOH或INNCL調(diào)至5.8。
將配制好的培養(yǎng)基分裝于清洗干凈,,烘干后的三角瓶中,,培養(yǎng)基高度約1cm左右,瓊脂約在40度時才凝固,,所以有充足的時間業(yè)分裝,。
將分裝好的培養(yǎng)基的三角瓶中塞上棉塞,大小要合適,,然后包上牛皮紙,,用橡皮盤扎緊。牛皮紙上標以記號準備滅菌,。
培養(yǎng)基的滅菌與保存,。
培養(yǎng)基內(nèi)含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),有利于細菌和真菌繁殖,,所以培養(yǎng)基配好后要及時滅菌,,用高壓鍋滅菌注意以下幾點:
(1) 檢查鍋內(nèi)的水量,一般高度到支持鍋座水平即可。
(2) 蓋好鍋蓋,,擰緊螺旋,,然后檢查排氣閥是事通暢。
(3) 用煤氣灶或電爐加熱,,當氣壓指針上升至6時,,放一次氣或打開放氣閥,加熱至鍋內(nèi)冒出大量熱氣,,以排盡鍋內(nèi)空氣,。
(4) 高壓鍋內(nèi)溫度達1200C,0,,1Mpa壓力時,,這時保持高壓來菌20分鐘,以后切斷電源,,是鍋內(nèi)壓力自然慢慢下降,,也可緩緩打開放氣閥放氣,使鍋內(nèi)壓力接近于0(氣壓表指針下降至0),,這時*打開放氣閥,。
(5) 打開鍋蓋,取出培養(yǎng)基,、滅菌水,、培養(yǎng)皿、濾紙等,。滅過菌的培養(yǎng)基通常置于100C下保存,,待培養(yǎng)基放置2—3天后,瓶內(nèi)水吸收干后即可使用,。培養(yǎng)基滅菌后不宜久放,,一般不超過一個月,多數(shù)情況滅菌后兩周內(nèi)使用完,。
接種——胡蘿卜愈傷組織的培養(yǎng),。
接種,是指經(jīng)過消素好的材料在無菌的情況下切成小塊(外植體)并放入培養(yǎng)基的過程,,要在無菌的環(huán)境中進行,。接種進要求無菌操作,所有接種材料要預(yù)選消毒,。
提前15分鐘將超凈工作臺打開過濾空氣,。
雙手用肥皂洗凈,,以70%乙醇棉擦試一遍,。
取已洗凈的胡蘿卜5cm切段,用70%乙醇浸炮30秒。然后無菌水沖凈,,再2%安替福氏浸炮15秒,,無菌水沖洗3——4遍置培養(yǎng)皿中。
在培養(yǎng)皿中用打孔器取下胡蘿卜的韌皮部切段,,切去兩端,,將材料切成厚3mm的薄片。
接種,,用鑷子將材料薄片迅速接入培養(yǎng)基中,,在酒精燈上移動著燒一下瓶口,塞上棉花塞,。
培養(yǎng),,接好種的培養(yǎng)基,放置溫度23——28℃光照1000——5000LuX,,光照時間每天約16——18小時的人工氣候箱中進行培養(yǎng),。隨著培養(yǎng)組織的不斷生長和細胞分裂,不久即形成愈傷組織并開始
植株誘導和轉(zhuǎn)載
除一些基尖,,側(cè)牙球莖之類的材料能直接培養(yǎng)長大志植物外,,葉,莖段,,花瓣等要經(jīng)過一個脫分化和再分化的過程,,才能長成植株。
由于加入培養(yǎng)基中各種激素的比例不同,,外植本可以沿著不同方向分化,;一種是先由外植本產(chǎn)生愈傷組織,有愈傷組織再分化出不字根或不定芽,,也可以由愈傷組織產(chǎn)生胚狀體,,再發(fā)育成小植株:另一種是不經(jīng)愈傷組織,可直接誘導出胚狀全而發(fā)育成植物,。
不同來源的外植體再生植株的途徑
胡蘿卜肉質(zhì)根誘導產(chǎn)生了愈傷組織之后,,需進一步轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基誘導產(chǎn)生根和芽,以獲得再生植株,。
生長點,、側(cè)芽、原球莖,、胚狀體根,、莖段、葉,、花芽,、花瓣,、胚狀體愈傷組織;再分化的芽和根,;試管苗,。
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