1、喆圖小編來(lái)講講它的適用范圍
本方法適用于清汁,、濁汁,、水和濃縮果汁中的耐酸熱菌的檢測(cè)。
2,、儀器和試劑
2.1 恒溫水?。?0±1℃。
2.2 恒溫培養(yǎng)箱:40±1℃,。
2.3 滅菌培養(yǎng)皿:直徑為90mm,。
2.4 滅菌試管:18×180mm。
2.5 濾膜:0.45um水系一次性濾膜,。
2.6 酵母粉,。
2.7 蛋白胨。
2.8 瓊脂粉,。
2.9 葡萄糖,。
2.10 吐溫80。
2.11 12.5%蘋果酸,。
2.12 滅菌蒸餾水,。
2.13 K氏培養(yǎng)基平板:在1000ml的三角瓶中放入500ml蒸餾水,加入1.25g酵母粉,、2.50g蛋白胨,、6.50g瓊脂粉、0.5g 葡萄糖和0.5ml吐溫80,,使其溶解,,輕輕蓋上三角瓶的蓋子,在121℃滅菌25分鐘,;在一個(gè)小燒杯中加入10ml蒸餾水和1.25克的蘋果酸,,攪拌直至溶解,將蘋果酸的水溶液用0.45um的濾膜過(guò)濾,,將處理過(guò)的蘋果酸水溶液加入到滅菌的K氏培養(yǎng)基中,,攪拌均勻,使其pH值達(dá)到3.7±0.1,。當(dāng)冷卻到大約50℃時(shí),將K氏培養(yǎng)基傾注到培養(yǎng)皿中,凝固后在0-5℃的冰箱中儲(chǔ)存,,有效期60天,,并記錄配制日期。
3,、操作步驟
3.1 樣品處理
3.1.1 濃縮清汁:
打開(kāi)水浴鍋,,調(diào)整溫度到80±1℃。以無(wú)菌操作,,取10ml濃縮清汁于15ml滅菌的試管中,,再移取10ml濃縮清汁于另一帶有溫度計(jì)的15mL的試管中,作為溫度控制用,,蓋上樣品試管的蓋子,。將上述樣品試管和溫度控制試管放在水浴鍋中,當(dāng)溫度達(dá)到80±1℃,,開(kāi)始計(jì)時(shí),,維持13分鐘(用計(jì)時(shí)器計(jì)時(shí))。冷卻至室溫,,用90-100ml的滅菌蒸餾水將熱處理過(guò)的樣品轉(zhuǎn)入滅菌容器中,,搖勻。將稀釋后的樣品溶液用0.45um的濾膜真空過(guò)濾,。
3.1.2 清汁,、水:
打開(kāi)水浴鍋,調(diào)整溫度到80±1℃,。以無(wú)菌操作,,取150ml清汁(或水)于已滅過(guò)菌的玻璃樣品瓶中,再移取150ml清汁(或水)于另一帶有溫度計(jì)的玻璃樣品瓶中,,作為溫度控制用,,蓋上樣品瓶的蓋子。將上述樣品試管和溫度控制試管放在水浴鍋中,,當(dāng)溫度達(dá)到80±1℃,,開(kāi)始計(jì)時(shí),維持13分鐘(用計(jì)時(shí)器計(jì)時(shí)),。將熱處理過(guò)的樣品冷卻至室溫,,用0.45um的濾膜真空過(guò)濾。
3.1.3 濁汁:
打開(kāi)水浴鍋,,調(diào)整溫度到80±1℃,。以無(wú)菌操作,取20ml濁汁于已滅過(guò)菌的試管中,再移取20ml濁汁于另一帶有溫度計(jì)的20mL的試管中,作為溫度控制用,,蓋上樣品試管的蓋子,。將上述樣品試管和溫度控制試管放在水浴鍋中,當(dāng)溫度達(dá)到80±1℃時(shí),開(kāi)始計(jì)時(shí),維持13分鐘(用計(jì)時(shí)器計(jì)時(shí))。冷卻至室溫,,將熱處理的樣品用0.45um的濾膜真空過(guò)濾,。
3.2 培養(yǎng)及計(jì)數(shù)
取掉過(guò)濾器的上部裝置,用滅菌的鑷子,,將過(guò)濾膜從過(guò)濾器上取下放在K氏培養(yǎng)基上,,輕敲數(shù)次,以保證濾膜與培養(yǎng)基接觸,。倒置于40-41℃恒溫培養(yǎng)箱中,,在恒溫培養(yǎng)箱底部放置一個(gè)有水的盤子,以調(diào)整恒溫培養(yǎng)箱的濕度,,培養(yǎng)5天,。培養(yǎng)結(jié)束后,記錄該培養(yǎng)溫度下濾膜上的菌落數(shù),。
根據(jù)對(duì)樣品的污染情況,,可選擇稀釋度。用滅菌吸管吸取25ml樣品,,加入到225ml滅菌蒸餾水中,,做成1:10的稀釋度;用滅菌吸管吸取1:10的稀釋液25ml,,加入到225ml滅菌蒸餾水中,,做成1:100的稀釋度,稀釋后的樣品的檢測(cè)方法同上,。培養(yǎng)結(jié)束后,,記錄濾膜上的菌落數(shù),并按相應(yīng)的稀釋度進(jìn)行計(jì)算,。
4,、數(shù)據(jù)處理
結(jié)果報(bào)告10ml的濃縮清汁樣品中含有的菌落數(shù),報(bào)告單位為cfu/10ml。
結(jié)果報(bào)告150ml的清汁(或水)樣品中含有的菌落數(shù),,報(bào)告單位為cfu/150ml,。
結(jié)果報(bào)告20ml的濁汁樣品中含有的菌落數(shù),報(bào)告單位為cfu/20ml,。
以上內(nèi)容僅供參考,!
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