一、 菌種
(一),、細(xì)菌:大腸桿菌(Escherichia coli),、枯草桿菌(Bacillus subtilis) 和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),;
(二)、真菌:啤酒酵母(Saccgaromyces cerevisiae),、米曲霉(Aspergillus oryzae)3402,、黑曲霉(Aspergillus niger)、葉點(diǎn)霉(Phyllosticta maydis )和刺盤孢霉(Colletotrichum musae)
二,、 培養(yǎng)基
(一) 細(xì)菌培養(yǎng)液:LB
液體:胰蛋白胨10.0g 酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸餾水定溶至1.0L pH 7.0~7.4 如要配置固體LB培養(yǎng)基,,加15.0g瓊脂糖/L
(二)、真菌培養(yǎng)液:馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA) 馬鈴薯(去皮切塊) 200.0g 葡萄糖 20.0g 瓊脂 18.0g,, 蒸餾水 1000mL pH 自然
三,、 器材
培養(yǎng)皿(90mm)、濾紙,、三角耙,、接種環(huán)、試管
四,、 實(shí)驗(yàn)步驟
(一),、抑菌圈的測定(濾紙片法)
1、菌種接種 將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次,,使菌種新鮮,,細(xì)菌置30℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,,霉菌置27℃,,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d,備抗菌實(shí)驗(yàn)用
2,、菌懸液制備 在超凈臺(tái)里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL),,接種環(huán)輕刮菌落,搖晃,,置旋渦混合器混勻。
3,、倒平板 在超凈臺(tái)里將培養(yǎng)基倒入平板,,每板約15mL左右,水平放置,,凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,,2d后觀察是否有菌落生長,若沒有則可供下一步實(shí)驗(yàn)使用,,否則需重新倒平板,。
4、涂布在超凈臺(tái)里用槍取0.1ml菌懸液注入平板,,放置5min左右后用三角耙涂布均勻,,每種菌設(shè)置兩個(gè)重復(fù)平板,。
5、貼片在超凈臺(tái)里將平板平均分為6個(gè)區(qū),,對角設(shè)置平行組,,同時(shí)用無菌水做對照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對照。每兩張濾紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼,,用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后,,取出貼在平板的位置,輕摁一下使濾紙片牢固,,置(正放)4℃冰箱中放24h,。
6、培養(yǎng)24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,細(xì)菌30℃,,霉菌27℃。細(xì)菌培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果,,霉菌72h后觀察結(jié)果,。
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