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原代細(xì)胞培養(yǎng)是指從活體中獲取的組織或細(xì)胞,在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境,在 無(wú)菌,、適當(dāng)溫度和一定營(yíng)養(yǎng)條件下,使之生存,、生長(zhǎng)和繁殖,下面由喆圖小編帶大家了解一下原代細(xì)胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的問(wèn)題。

錯(cuò)誤1：一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正1：原代細(xì)胞對(duì)解凍過(guò)程非常敏感,，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,，并轉(zhuǎn)移到無(wú)菌操作臺(tái),。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞,，并置于培養(yǎng)箱中,。

錯(cuò)誤2：解凍match小瓶后直接離心原代細(xì)胞

糾正2：我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害,。記住,，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯(cuò)誤3：允許原代細(xì)胞變得過(guò)于融合

糾正3：當(dāng)生長(zhǎng)至100％匯合時(shí),，原代細(xì)胞可以變得衰老,。記住，原代細(xì)胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長(zhǎng),。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95％融合時(shí),，對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

錯(cuò)誤4：傳代原代細(xì)胞時(shí)過(guò)度胰蛋白酶消化

糾正4：當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí),，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞,。此外，記得在胰蛋白酶消化后*中和細(xì)胞中的胰酶,，因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞,。

錯(cuò)誤5：原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存

糾正5：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感,，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

錯(cuò)誤6：原代細(xì)胞可以無(wú)限的增殖

糾正6：與細(xì)胞系不同,，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力,。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外,，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類(lèi)型,，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移,，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞,。

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