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今日喆圖小編教大家如何提取質(zhì)粒DNA的實(shí)驗(yàn),，相關(guān)設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱,、恒溫水浴鍋、真空干燥箱

實(shí)驗(yàn)方法原理

堿裂解法是基于DNA的變性與復(fù)性差異而達(dá)到分離目的的,。堿性使質(zhì)粒DNA變性,，再將pH值調(diào)至中性使其復(fù)性，復(fù)性的為質(zhì)粒DNA,，而染色體DNA不會(huì)復(fù)性,，纏結(jié)成網(wǎng)狀物質(zhì)，通過離心除去,。

實(shí)驗(yàn)材料

大腸桿菌

試劑,、試劑盒 Tris-HclEDTA葡萄糖NaOHKAacNaAc異丙醇溶菌酶酚:Cl仿無水乙醇LB培養(yǎng)基 
儀器、耗材 超凈工作臺(tái),、恒溫培養(yǎng)箱,、搖床、恒溫水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī)取液器,、低溫冰箱冷凍、真空干燥機(jī),、電泳儀水平電泳槽、紫外觀測(cè)儀 
實(shí)驗(yàn)步驟 一,、材料與試劑準(zhǔn)備

1. 材料：大腸桿菌,。

2. 儀器：超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱,，搖床,，恒溫水浴鍋，臺(tái)式離心機(jī),，取液器一套,，低溫冰箱，冷凍真空干燥機(jī),，電泳儀,，水平電泳槽，紫外觀測(cè)儀,。

3. 試劑：（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl（pH7.4）,，10 mM EDTA（pH8.0）,，50 mM葡萄糖，高壓滅菌,，4℃保存,。（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用,。（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8,，高壓滅菌，4℃保存,。（4）3 M NaAc pH5.2,，高壓滅菌，

4℃保存,。（5）異丙醇,，溶菌酶（8 mg/ml），酚/Cl仿,，無水乙醇,，70%乙醇，LB培養(yǎng)基,，電泳試劑,。

二、操作步驟

1. 細(xì)菌繁殖：LB培養(yǎng)基,，2 ml/20 ml,，37℃，200 rpm,，搖一搖,，過夜。

2. 離心10 min,，5 000 rpm,， 4℃；棄上淸液,。

3. 沉淀（菌體細(xì)胞）預(yù)冷的TES緩沖液洗滌,，離心10 min，5 000 rpm,， 4℃,，加入預(yù)冷的1 ml Solution I，冰浴10 min,。

4. 重新懸浮,，加入150 ul溶菌酶母液，室溫放置5 min,。

5. 加入1.2 ml Solution II,， 冰浴5 min,。

6. 加入0.9 ml預(yù)冷乙酸鉀，混勻,，離心10 min,，12 000 rpm，4℃,。

7. 加入1.5 ml異丙醇,，-20℃冰箱內(nèi)放置15 min。

8. 離心10 min,，12 000 rpm,，4℃。

9. 取沉淀,，懸于400 ul TE緩沖液中,。

10. 加入40 ul，3 M NaAc,。

11. 酚/Cl仿,，抽提，乙醇沉淀,。

12. 離心10 min,，12 000 rpm，4℃,。

13. 取沉淀,，冷凍干燥，再懸浮于50 ul TE緩沖液中,。

14. 電泳檢測(cè)提取DNA的質(zhì)量,。

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