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細(xì)胞的力學(xué)特性與細(xì)胞的狀況和功能相關(guān),,由功能上重要的細(xì)胞成分控制,例如細(xì)胞骨架,,癌細(xì)胞比健康細(xì)胞更容易變形,。它們構(gòu)成了一種新興的無標(biāo)記生物標(biāo)志物,可以直接了解細(xì)胞功能或功能障礙,。
細(xì)胞力學(xué)特性有助于理解和評(píng)估藥物治療效果,、免疫細(xì)胞活化,、干細(xì)胞分化,、癌癥預(yù)后或培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)和質(zhì)量的評(píng)估。細(xì)胞力學(xué)構(gòu)成了研究從發(fā)育到疾病的主題的關(guān)鍵科學(xué)目標(biāo),。
細(xì)胞機(jī)械力分型是一種無需標(biāo)記就可以定量細(xì)胞功能性改變的方法,,在臨床診斷和預(yù)后判斷等方面有著很大的應(yīng)用潛力。不過由于細(xì)胞太小,,分析單個(gè)細(xì)胞的機(jī)械力特性是很困難的,。之前的分析方法技術(shù)含量高、操作復(fù)雜,、分析量小,、檢測(cè)速度慢。
用流式速度檢測(cè)單細(xì)胞生物力學(xué)特性,這種超快速的細(xì)胞機(jī)械力篩選已經(jīng)被英國乃至歐洲研究者們廣泛接受,。并在國際頂級(jí)期刊上發(fā)表了多篇文獻(xiàn)進(jìn)行了充分驗(yàn)證,。
此方法是利用力和光來描述細(xì)胞的新技術(shù),可以流式細(xì)胞儀的速度檢測(cè)單細(xì)胞形態(tài)和流變學(xué)性質(zhì),。細(xì)胞被泵入一個(gè)微流體芯片中,,同時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)拍照、分析和存儲(chǔ)數(shù)據(jù),。
此外,,還可以對(duì)細(xì)胞施加非破壞性的力,以研究細(xì)胞對(duì)應(yīng)力做出的特異性應(yīng)答,,并將其作為細(xì)胞的無標(biāo)記,、內(nèi)源性生物標(biāo)志物??蓪?shí)時(shí)測(cè)量,、分析、保存所有單細(xì)胞參數(shù),。
技術(shù)原理
高通量單細(xì)胞力學(xué)測(cè)試系統(tǒng)用流體動(dòng)力使細(xì)胞變形:當(dāng)單個(gè)細(xì)胞通過狹窄的通道時(shí),,周圍的流體會(huì)產(chǎn)生使單個(gè)細(xì)胞變形的力。這些力源于流體內(nèi)的摩擦力,,這會(huì)逐漸降低靠近通道壁的流速,。通道中的細(xì)胞暴露于液體中由此產(chǎn)生的速度梯度,并經(jīng)歷施加輕柔擠壓的力場,。高速成像揭示了由此產(chǎn)生的細(xì)胞變形,。變形程度表示細(xì)胞的剛度。
為了產(chǎn)生確定的力,,孤立的細(xì)胞被泵送通過橫截面略大于細(xì)胞橫截面的微通道,。周圍流體的壓力梯度產(chǎn)生流動(dòng)剖面并使細(xì)胞流體動(dòng)力學(xué)變形。流體的流速和粘度控制作用在細(xì)胞上的力,。細(xì)胞可以通過流體動(dòng)力變形,,力由流速和粘度控制,較軟的細(xì)胞顯示較大的變形,。
高通量單細(xì)胞力學(xué)測(cè)試系統(tǒng)能快速測(cè)量單細(xì)胞的變形能力,。細(xì)胞以幾厘米/秒的速度從右向左流動(dòng),通過來自上下兩個(gè)通道的鞘流集中在微通道中,。系統(tǒng)允許以高達(dá)每秒 1000 個(gè)細(xì)胞的高速率進(jìn)行非破壞性的連續(xù)測(cè)量 - 比其他細(xì)胞力學(xué)分析方法(例如,,微量移液器抽吸 100 個(gè)細(xì)胞/小時(shí),RT-DC 1,000 個(gè)細(xì)胞/秒)提高了 10000 倍,。
高通量有助于在細(xì)胞生物學(xué)和臨床研究中作為標(biāo)準(zhǔn)分析方法的應(yīng)用,,只需幾分鐘即可獲得具有統(tǒng)計(jì)意義的單細(xì)胞測(cè)量值,。通過對(duì)細(xì)胞大小或變形能力進(jìn)行門控,可以檢測(cè)到低數(shù)量的細(xì)胞亞群,。
應(yīng)用介紹
1 血液制品的質(zhì)量控制
細(xì)胞類型:血小板,、紅細(xì)胞、干細(xì)胞
結(jié)果:本研究中的作者使用帶有 FluorescenceModule 的 AcCellerator 系統(tǒng)解決了如何評(píng)估血小板濃縮物,、紅細(xì)胞和造血干細(xì)胞等細(xì)胞血液產(chǎn)品的問題,,這些產(chǎn)品可以無標(biāo)記地從小樣本量中進(jìn)行評(píng)估。作者展示了RT-DC 作為一種強(qiáng)大的質(zhì)量控制工具的應(yīng)用,,以監(jiān)測(cè)儲(chǔ)存在不同溫度下的血小板的狀態(tài),,并通過納米顆粒暴露來驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)的變化。此外,,他們使用機(jī)械表型來強(qiáng)調(diào) PVC 血袋中的增塑劑對(duì)紅細(xì)胞 流變學(xué)的影響,。后,他們調(diào)查了冷凍保護(hù)劑的影響造血干細(xì)胞的力學(xué)特性,??偠灾撗芯勘砻?,實(shí)時(shí)變形細(xì)胞術(shù)可用作具有高度創(chuàng)新潛力的無標(biāo)記診斷,。
2 轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)——懸浮心肌細(xì)胞的無標(biāo)記表征
細(xì)胞類型: 心肌細(xì)胞、人源性多能干細(xì)胞
結(jié)果:人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (hiPSC) 在基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化研究中越來越受到關(guān)注,。特別是再生醫(yī)學(xué)將這些細(xì)胞視為替代組織的來源,,例如在事故發(fā)生后。在 Pires 等人的作品中,。研究人員探索了RT-DC 在表征 hiPSC 衍生的心肌細(xì)胞方面的潛力,,這些心肌細(xì)胞構(gòu)成了心臟的一種重要細(xì)胞類型。研究人員可以證明高通量機(jī)械表征能夠監(jiān)測(cè)這些細(xì)胞結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化,。利用這些結(jié)果可能允許在移植前對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行無標(biāo)記評(píng)估,,而無需熒光標(biāo)記。
3 寄生蟲檢測(cè)
細(xì)胞類型:紅細(xì)胞
結(jié)果:使用 AcCellerator 系統(tǒng),,我們解決了是否可以根據(jù)機(jī)械細(xì)胞變化檢測(cè)到紅細(xì)胞(RBC) 內(nèi)瘧原蟲浸潤的問題,。在體外感染RBC 樣品后,細(xì)胞在 48 小時(shí)的寄生蟲生命周期內(nèi)進(jìn)行了分析,。在典型樣品中,,大約8-10% 的所有細(xì)胞被感染,,與未處理的對(duì)照相比,,變形減少。有趣的是,,未暴露于寄生蟲的受感染樣本中的細(xì)胞也顯示變形減少,。這暗示了旁觀者效應(yīng)。
此外,我們利用 AcCellerator 系統(tǒng)的特性來獲取每個(gè)單細(xì)胞的明場圖像,。該研究表明,,我們的軟件能夠直接識(shí)別細(xì)胞內(nèi)的寄生蟲。這表明直接從圖像分析中檢測(cè)寄生蟲的可能性,。一個(gè)過程,,可以在幾秒鐘內(nèi)完成。
4 人工紅細(xì)胞的表征品
細(xì)胞類型: 紅細(xì)胞
用于獻(xiàn)血的治療性紅細(xì)胞(RBC)的生產(chǎn)是一個(gè)非常重要的研究領(lǐng)域,。主要挑戰(zhàn)之一是區(qū)分有核和去核紅細(xì)胞,。后者仍然含有細(xì)胞核,需要在任何臨床應(yīng)用之前從人工血樣中取出,。使用AcCellerator,,我們以超過每秒1,000 個(gè)細(xì)胞的吞吐率證明了我們的系統(tǒng)可以區(qū)分兩種RBC 類型。將來,,我們的機(jī)械細(xì)胞分析與無標(biāo)記分選策略的結(jié)合將有助于生產(chǎn)純化的人工血樣,。
5 解析中性粒細(xì)胞活化的動(dòng)力學(xué)
細(xì)胞類型:中性粒細(xì)胞
結(jié)果:高測(cè)量速率和快速樣品制備允許觀察動(dòng)力學(xué)過程。下圖顯示了當(dāng)來自新鮮血液的中性粒細(xì)胞暴露于甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸 (fMLP) 時(shí)機(jī)械性能的變化,。三肽 fMLP 由許多細(xì)菌釋放,,并向免疫系統(tǒng)細(xì)胞發(fā)出感染信號(hào)。
6檢測(cè)細(xì)胞骨架的變化
細(xì)胞類型:HL60
結(jié)果:細(xì)胞骨架的改變可以通過機(jī)械分析來量化,。Cytochalasin D 對(duì)肌動(dòng)蛋白微絲的消耗導(dǎo)致更高的變形,,因此降低了 HL60 細(xì)胞的剛度。下圖顯示了處理和未處理細(xì)胞的疊加,。
7調(diào)查過去條件的影響
細(xì)胞類型:造血干細(xì)胞,、CD34陽性細(xì)胞
結(jié)果:原代人類造血干細(xì)胞 (HSC) 通常通過跨膜蛋白 CD34 的存在來識(shí)別。下圖比較了從骨髓獲得的 CD34+ 細(xì)胞和通過粒細(xì)胞集落刺激因子 (G-CSF) 動(dòng)員到外周血中的 CD34+ 細(xì)胞,。雖然根據(jù)其 CD34+ 分類相同,,但源自外周血的 HSC 比源自骨髓的 HSC 更硬。
用戶
用戶1
University Heidelberg and Max Planck Institute for Medical Research
Dr. Kerstin G?pfrich, Max Planck Research Group Leader
Biophysical Engineering Group
德國海德堡大學(xué)和馬克斯普朗克醫(yī)學(xué)研究所
馬克斯普朗克研究小組負(fù)責(zé)人Kerstin G?pfrich 博士
生物物理工程研究小組
研究方向:
試圖設(shè)計(jì)具有全新組裝,、信息傳播和復(fù)制方式的細(xì)胞,。
為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),他們將生物物理工具(包括DNA 折紙,、微流體,、脂質(zhì)囊泡和3D 打印)與實(shí)驗(yàn)方法(如共聚焦和高速顯微鏡,、原子力顯微鏡,、冷凍電子顯微鏡和計(jì)算方法)相結(jié)合。
目前從事以下項(xiàng)目:
用于合成細(xì)胞的 DNA 納米技術(shù)和 DNA 折紙
合成細(xì)胞中的對(duì)稱性破壞
基于膜的隔室的力學(xué)
合成細(xì)胞與3D 打印
信息編碼和處理
用戶2:
University of Greifswald
Biomechanics Group
德國格賴夫斯瓦爾德大學(xué)
生物力學(xué)研究組
主要研究重點(diǎn)是了解分子,、細(xì)胞和組織的機(jī)械特性及其對(duì)心血管生理學(xué)和病理學(xué)領(lǐng)域生物功能的影響,。
主要興趣是評(píng)估外部機(jī)械特性在推動(dòng)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化方面的作用及其對(duì)細(xì)胞生理學(xué)的影響,。此外,他們還使用細(xì)胞力學(xué)作為在各種心肌病背景下解釋細(xì)胞生理狀態(tài)的重要依據(jù),。
該系統(tǒng)近三年代表性文獻(xiàn)
01,,2022 - Frontiers in Physiology
Changes in Blood Cell Deformability in Chorea-Acanthocytosis and Effects of Treatment With Dasatinib or Lithium.
Authors:Reichel F., Kr?ter M., Peikert K., Gla? H., Rosendahl P., Herbig M., Rivera Prieto A., Kihm A., Bosman G., Kaestner L., Hermann A., Guck J.
02,2022 - Translational Psychiatry
Depressive disorders are associated with increased peripheral blood cell deformability: a cross-sectional case-control study (Mood-Morph)
Authors:Walther A., Mackens-Kiani A., Eder J., Herbig M., Herold C., Kirschbaum C., Guck J., Wittwer L.D., Beesdo-Baum K., Kr?ter, M.
03,,2022 - Communications Biology
Ex vivo anticoagulants affect human blood platelet biomechanics with implications for high-throughput functional mechanophenotyping.
Authors:Sachs L., Wesche J., Lenkeit L., Greinacher A., Bender M., Otto O., Palankar R.
04,,2022 - Scientific Reports
Label-free imaging flow cytometry for analysis and sorting of enzymatically dissociated tissues.
Authors:Herbig M., Tessmer K., N?tzel M., Nawaz A.A., Santos-Ferreira T., Borsch O., Gasparini S.J., Guck J., Ader M.
05,2022 - Scientific Reports
Machine learning assisted real?time deformability cytometry of CD34+ cells allows to identify patients with myelodysplastic syndromes.
Authors:Herbig M., Jacobi A., Wobus M., Weidner H., Mies A., Kr?ter M., Otto O., Thiede C., Weickert M., G?tze K.S., Rauner M., Hofbauer L.C., Bornh?user M., Guck J., Ader M., Platzbecker U., Balaian E.
06,,2021 - Blood
HIF2α is a direct regulator of neutrophil motility
Authors:Sormendi S., Deygas M., Sinha A., Bernard M., Krüger A., Kourtzelis I., Le Lay G., Sáez P.J., Gerlach M., Franke K., Meneses A., Kr?ter M., Palladini A., Guck J., Coskun ü., Chavakis T., Vargas P., Wielockx B.
07,,2021 - Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle
Inhibition of the NLRP3/IL‐1β axis protects against sepsis‐induced cardiomyopathy
Authors:Busch K., Kny M., Huang N., Klassert T.E., Stock M., Hahn A., Graeger S., Todiras M., Schmidt S., Chamling B., Willenbrock M., Gro? S., Biedenweg D., Heuser A., Scheidereit C., Butter C., Felix S.B., Otto O., Luft F.C., Slevogt H., Fielitz J.
08,2021 - Developmental Cell
Mechanical Adaptability of Tumor Cells in Metastasis
Authors:Gensbittel V, Kr?ter M, Harlepp S, Busnelli I, Guck J, Goetz JG.
09,,2021 - Annals of the Rheumatic Diseases
Proteomic, biomechanical and functional analyses define neutrophil heterogeneity in systemic lupus erythematosus.
Authors:Bashant KR, Aponte AM, Randazzo D, Rezvan Sangsari P, Wood AJ, Bibby JA, West EE, Vassallo A, Manna ZG, Playford MP, Jordan N, Hasni S, Gucek M, Kemper C, Conway Morris A, Morgan NY, Toepfner N, Guck J, Mehta NN, Chilvers ER, Summers C, Kaplan MJ.
10,,2020 - Nature Methods
A comparison of microfluidic methods for high-throughput cell deformability measurements
Authors:Urbanska M., Munoz H.E., Bagnall J.S., Otto O., Manalis S.R., Di Carlo D., Guck J.
11,2020 - BioRxiv
AIDeveloper: deep learning image classification in life science and beyond
Authors:Kr?ter M., Abuhattum S., Soteriou D., Jacobi A., Krüger T., Guck J., Herbig M.
12,,2020 - Materials Today Bio
Cancer-associated fibroblasts of the prostate promote a compliant and more invasive phenotype in benign prostate epithelial cells
Authors:Jaeschke A, Jacobi A, Lawrence MG, Risbridger GP, Frydenberg M, Williams ED, Vela I, Hutmacher DW, Bray LJ, Taubenberger A
13,,2020 - Haematologica
Coactosin-like 1 integrates signaling critical for shear-dependent thrombus formation in mouse platelets
Authors:Scheller I, Stritt S, Beck S, Peng B, Pleines I, Heinze KG, Braun A, Otto O, Ahrends R, Sickmann A, Bender M, Nieswandt B.
14,2020 - Lab on a Chip
Deformability-induced lift force in spiral microchannels for cell separation.
Authors:Guzniczak E, Otto O, Whyte G, Willoughby N, Jimenez M, Bridle H.
15,,2020 - Nature Communications
High-throughput cell and spheroid mechanics in virtual fluidic channels
Authors:Panhwar M.H., Czerwinski F., Dabbiru V.A.S., Komaragiri Y., Fregin B., Biedenweg D., Nestler P., Pires R.H., Otto O.
16,,2020 - Nature Methods
Intelligent image-based deformation-assisted cell sorting with molecular specificity
Authors:Nawaz AA, Urbanska M, Herbig M, N?tzel M, Kr?ter M, Rosendahl P, Herold C, Toepfner N, Kubánková M, Goswami R, Abuhattum S, Reichel F, Müller P, Taubenberger A, Girardo S, Jacobi A, Guck J.
17,2020 - Lab on a Chip
Label-free on chip quality assessment of cellular blood products using real-time deformability cytometry
Authors:Aurich K., Fregin B., Palankar R., Wesche J., Hartwich O., Biedenweg D., Nguyen TH., Greinacher A., Otto O.
18,,2020 - Polymers
Microfluidic Fabrication of Click Chemistry-Mediated Hyaluronic Acid Microgels: A Bottom-Up Material Guide to Tailor a Microgel's Physicochemical and Mechanical Properties
Authors:Heida T, Otto O, Biedenweg D, Hauck N, Thiele J.
19,,2020 - Developmental Cell
Oncogenic Signaling Alters Cell Shape and Mechanics to Facilitate Cell Division under Confinement
Authors:Matthews HK., Ganguli S., Plak K., Taubenberger AV., Win Z., Williamson M., Piel M., Guck J., Baum B.
20,2020 - Biotechnoly and Bioengineering
Purifying stem cell-derived red blood cells: a high-throughput label-free downstream processing strategy based on microfluidic spiral inertial separation and membrane filtration.
Authors:Guzniczak E, Otto O, Whyte G, Chandra T, Robertson NA, Willoughby N, Jimenez M, Bridle H.
21,,2020 - Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis
Quantifying single-platelet biomechanics: An outsider's guide to biophysical methods and recent advances
Authors:Sachs L., Denker C., Greinacher A., Palankar R.
22,,2020 - Hamostaseologie
Role of Platelet Cytoskeleton in Platelet Biomechanics: Current and Emerging Methodologies and Their Potential Relevance for the Investigation of Inherited Platelet Disorders
Authors:Zaninetti C, Sachs L, Palankar R.
23,2020 - Biology of the Cell
The mechanics of myeloid cells
Authors:Bashant KR., Toepfner N., Day CJ., Mehta NN., Kaplan MJ., Summers C., Guck J., Chilvers ER.
24,,2020 - Journal of Polymer Science
Tunable polymer microgel particles and their study using microscopy and real‐time deformability cytometry
Authors:Sinjari S, Freitag JS, Herold C, Otto O, Smith DM, St?ver HDH
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