核酸檢測是確診 SARS-CoV-2 感染的最主要依據,。目前可用于 RNA 病毒的核酸檢測技術主要有基因測序、聚合酶鏈式反應（PCR）,、等溫核酸擴增等,。其中熒光定量PCR檢測方法是*方案。

然而反轉錄實時熒光定量 PCR（RT-qPCR）的檢測方法需要依賴溫控精度良好的熱循環(huán)儀,，并且PCR反應中必須的變性,、退火和延伸步驟，使整個擴增檢測時間較長，難以實現對SARS-CoV-2的現場快速檢測,。

核酸等溫擴增技術無需熱循環(huán)儀,，擴增反應效率高、速度快,，非常適合于病原體核酸的現場快速檢測,。因此不少相關從業(yè)人員，都曾把核酸快速檢測的希望,，寄托于等溫擴增技術上面,。

不少核酸等溫擴增方法已相繼被用于SARS-CoV-2的檢測。包括依賴核酸序列的擴增技術（NASBA）,、重組酶聚合酶擴增技術（RPA）,、環(huán)介導等溫擴增技術（LAMP）、交叉引發(fā)擴增技術（CPA）,、切刻內切酶核酸擴增反應（NEAR）等,。

這些技術原理各異，產物檢測方法各不相同,，造成它們在檢測SARS-CoV-2時的靈敏度,、特異性、靶標基因,、所需儀器,、檢測時間等方面存在差異。

下圖所示是已經獲得國家藥監(jiān)局批準的主要的核酸等溫擴增檢測核酸技術,，及其相關情況：

數據來源：馬學軍⁵

市面上這幾種等溫擴增的方法各有優(yōu)缺點,，以下來分析

SAT是在 NASBA 技術的基礎上，進一步提高了檢測的靈敏度和特異性,，但是并未能從根本上克服NASBA 技術反應時間長的問題,。

熒光RT-RAA法：熒光RAA方法靈敏度較高。但是對樣品核酸品質要求較高,，需要搭配傳統的提取方法,。并且樣品同一時間只能檢測單一靶標基因。

CPA實時熒光法：CPA擴增產物采用分子信標進行檢測,，然而這個方法的通量太小,。此外交叉引物的設計要求較高，在研發(fā)過程中,，引物的篩選和測試,，十分繁瑣。這可能會造成基于該技術的檢測試劑平臺開發(fā)周期較長,。

LAMP芯片法：可利用肉眼觀察顏色變化,，或灰度檢測來判讀檢測結果,，雖然降低了對儀器設備的要求，適合在資源有限和經濟不發(fā)達地區(qū)開展核酸檢測,，然而主觀判斷顏色變化存在較大個體差異,，有可能影響結果判讀。

此外國外,，曾經有相關研究人員就病毒檢測,，針對LAMP 實驗方法，以及商品化新冠檢測試劑盒的作一個對比,，對不同濃度的陽性樣品進行檢測對比,，結果如下表所示:

結果顯示在中低濃度的陽性樣品中，LAMP法與熒光定量PCR對比,，陽性檢出率較低,，而且檢測下限也較差。

除了上述提到的情況外,，等溫擴增還有以下一些問題

現階段而言，某些等溫擴增技術具有一定現場應用的前景,，然而目前的產品通量偏低，時間偏長和靈敏度偏低,，還是限制了這項技術的應用場景,。這些缺點限制了等溫擴增的發(fā)展，也造成了等溫擴增技術空有好的設想卻遲遲無法落地的困境,。

那有沒有既兼具了等溫擴增快速,、儀器簡單的特點，而又有傳統熒光定量PCR特異性好、準確度高的檢測方法,？答案是有的,。快速熒光定量PCR就是這個問題的解決方法,。它既有傳統熒光定量PCR準確度高,，靈敏度好的特點，而又通過技術革新,，具備比等溫擴增更快速完成實驗的能力,。

傳統的熒光定量PCR實驗時間長，是由于受到儀器升降溫速度,，以及傳熱的效率所限,，整個實驗時間時長一般為70-120分鐘。

一般來說,，熒光定量PCR反應的溫度條件是較為固定的,，既然無法改變溫度條件，若想提高整個實驗的速度,，那么只能從兩方面著手進行優(yōu)化：一是提升溫控性能,，二是提高熱傳遞效率。

百泰克公司歷時三年研發(fā)的PCR儀,，就是從這兩方面入手,，打破傳統熒光PCR反應時間的枷鎖，為整個熒光定量PCR技術帶來革新,。

百泰克快速熒光定量PCR儀BTK-8,，采用先進的升降溫模塊，升降溫可達12℃/s,，平均升降溫速度為10℃/s,，為傳統熒光PCR儀的3-5倍。由于變溫PCR反應時,，溫度需要從58℃提升至95℃,，再降至58℃，如此循環(huán)40~45次,，因此升降溫速率的提升可將原本70-120min的檢測提速至20~30min完成,。

耗材方面，BTK-8摒棄了傳統的0.1ml,、0.2ml PCR反應管,，采用新型的注塑工藝與柔性膜結合技術，研發(fā)芯片式反應耗材,，適合大規(guī)模機械化生產,，成本進一步降低,。

單個芯片包含有10個獨立的樣品孔，芯片加樣孔較小,，不容易與空氣進行交換,，從而大大降低了孔洞間的氣溶膠交叉污染的可能性，檢測體系具有超高的檢測準確性,，可達到ABI Q6同等靈敏度,，且芯片加樣無需離心去掉氣泡，操作起來更加便捷,。

從下表可以看出,，現在BTK-8這款快速定量PCR儀，已經能把實驗時間壓縮至30分鐘以下,，而且檢測下限能夠達到200 copies/ml,，能滿足現在的檢測需求。相比于等溫擴增技術,，快速熒光PCR的時間更短,、準確性更高。

在過去的時間內,，等溫擴增技術憑借其簡單快速,、便于在基層單位推廣的特點，在部分人畜共患病,、婦科惡性腫瘤,、以及多種呼吸道疾病的檢測中發(fā)揮著一定的作用。然而伴隨著BTK-8快速熒光PCR儀的橫空出世,，使得相關的檢測有了一個更好的選擇,。能提供更快捷、準確實驗結果的快速熒光定量PCR儀,，將會替代等溫擴增的檢測手段,，在多個領域中發(fā)揮巨大作用。

特別是在病毒疫情仍然全球流行的時期,，由于各國防控情況不平衡,，病毒或將在相當長的一段時間內與人類共存，甚至有可能會成為一種長期存在的一種呼吸道傳播病原體,。而在口岸快速排查,，基層發(fā)熱門診快速分流的實際需求，均要求能夠提供快速,、準確,、有效的實驗檢測結果。相比于等溫擴增技術,、BTK-8快速熒光PCR儀則更能滿足這些場景的需求,。