思拓凡Cytiva(原GE生命科學(xué))的預(yù)裝柱和填料是做蛋白純化經(jīng)常會(huì)用到的產(chǎn)品,,預(yù)裝柱主要分以下幾種
一、吸附式層析(親和,,離子,,疏水)通常柱型比較短粗,柱型有HiTrap 1ml(7/25),,HiTrap 5ml(16/25),,HiPrep 20ml(16/100),HiScreen 4.7ml(7.7/100)幾種,。
1,、HiTrap柱型
HiTrap是常用的1ml和5ml柱型。柱高都是相同的25mm,1ml的柱子內(nèi)徑為7mm,,5ml的柱子內(nèi)徑為16mm,。1ml和5ml柱型的選擇可以根據(jù)柱子的載量來選擇。通過查找手冊(cè)可以查到預(yù)裝柱每ml填料可以結(jié)合多少蛋白,,5ml的柱子可以結(jié)合5倍的蛋白,。HiTrap預(yù)裝柱也可以通過2-3根首尾串聯(lián)從而增加上樣量。
2,、HiPrep柱型
HiPrep選用了比HiTRap更大體積的柱型以增加上樣量,。HiPrep的柱體積為20ml,柱子內(nèi)徑為16mm,,高度為100mm,。
3、HiScreen柱型
HiScreen柱型的體積為4.7ml,,內(nèi)徑為7.7cmm,,柱高100mm。主要用于工藝平臺(tái)的方法優(yōu)化和方案篩選,。柱床高度為10cm,,通過串聯(lián)可以達(dá)到20cm。較小的柱型有效降低優(yōu)化階段樣品的消耗和時(shí)間成本,,并且在生產(chǎn)中通過放大柱子內(nèi)徑而不改變高度的方法,,可以將參數(shù)有效放大至大體積工業(yè)生產(chǎn)中。
二,、分子篩的柱型通常比較瘦長(zhǎng),。由于是非吸附式層析,分子篩的上樣量一般為柱體積的2%-5%,。分子篩的柱型有24ml(10/300),3ml(5/150),,3ml(3.2/300),,120ml(16/600),320ml(26/600),。
1,、高分辨率半制備型24ml(10/300)
10/300為常規(guī)純化中常用柱型。柱體積為24ml,,內(nèi)徑為10mm,,柱高300mm。推薦上樣量為25-500ul,。Superdex Increase采用10/300的柱型,,9um粒徑,在保持較高上樣量的同時(shí),具有超高分辨率,。
2,、高分辨率小規(guī)模3.2/300
3.2/300具有和10/300相同的柱高和較小的內(nèi)徑。柱體積為3ml,,內(nèi)徑和柱高分別為3.2mm和300mm,。推薦上樣量范圍為4-50ul。采用更小柱體積有利于減少樣品和緩沖液的損耗,,并且減少樣品的稀釋,。
3、快速篩選5/150柱型
5/150柱型具有更短的柱床高度,。柱床體積為3ml,內(nèi)徑和柱高為5mm和150mm,。推薦上樣量為4-50ul。更短的柱型有利于減少樣品和緩沖液的消耗,,并且大大減少篩選時(shí)間,。在幾分鐘內(nèi)即可得到有效結(jié)果。
4,、大體積16/600和26/600
16/600柱體積為120ml,內(nèi)徑和柱高分別為16mm和600mm,,最大上樣量為5ml。26/600柱體積為320ml,,內(nèi)徑和柱高分別為26mm和600mm,,最大上樣量為13ml。如果上樣量比較大,,可以考慮這兩種柱型,。
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