DNA提取生物磁珠屬于生物生物磁珠的一種,,其中心為氧化鐵內(nèi)核,,中層包裹封閉基質(zhì),外層修飾官能團(tuán)。應(yīng)用于DNA吸附與提取純化的領(lǐng)域,,具有一些重要的參數(shù)要求,,如半沉降時(shí)間,磁吸時(shí)間,,粒徑,,比表面積,表面官能團(tuán)密度等,。參數(shù)的差異不僅會(huì)導(dǎo)致操作復(fù)雜程度的不同,,更會(huì)導(dǎo)致提取結(jié)果的不同,我們?cè)谶x擇DNA提取生物磁珠的時(shí)候,,更要注重參數(shù)的區(qū)別,,以下4種參數(shù)是選擇DNA提取生物磁珠的有效參考。
1,、懸浮性
DNA提取生物磁珠雖然具有一定的流動(dòng)性,,能夠均勻分散在液體中,跟隨液相進(jìn)入實(shí)驗(yàn)體系,,但生物磁珠畢竟還是固體,,會(huì)在液體中以一定速度沉降。所以DNA提取生物磁珠的半沉降時(shí)間應(yīng)在2min以上,,才能保證加入生物磁珠時(shí)不會(huì)因?yàn)槌两颠^快而導(dǎo)致加入量不準(zhǔn)確,,如果是多樣本的操作,對(duì)生物磁珠的半沉降時(shí)間要求應(yīng)該更高,。生物磁珠良好的懸浮性,,可以在操作過程中不用頻繁混勻生物磁珠,方便快捷的同時(shí)增加了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和均一性,。
2,、磁吸時(shí)間
DNA提取生物磁珠攜帶目的DNA與體系中雜質(zhì)分離的過程,主要是通過外加磁場使生物磁珠定向移動(dòng)并達(dá)到固液分離的目的,,所以生物磁珠的磁吸時(shí)間會(huì)影響固液分離的時(shí)間,,有些品牌的生物磁珠磁吸速度特別慢,這就影響了整體實(shí)驗(yàn)效率,。DNA提取生物磁珠,,磁吸時(shí)間均小于30s,適應(yīng)手動(dòng)和儀器操作進(jìn)行核酸純化的實(shí)驗(yàn)頻率,。
3,、比表面積
部分使用DNA提取生物磁珠的實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)為粒徑越小的生物磁珠比表面積越大吸附效果也越好,這種想法并不*正確,。因?yàn)樯锎胖楸砻娌⒉皇枪饣秸那蛎?,而是在中間基質(zhì)層有孔洞,,外圍修飾集團(tuán)有凸起的,比表面積并不由粒徑大小決定,,而且也并不是比表面積越大吸附效果就越好的,。有研究表明,當(dāng)比表面積在60m2/g時(shí),,對(duì)核酸的吸附效果較好,。粒徑在300nm左右的生物磁珠包被基質(zhì)層薄內(nèi)陷孔洞少,孔容孔徑低,;粒徑在1um左右的生物磁珠包被基質(zhì)層厚,,表面有大量孔洞,兩者比表面積都可以達(dá)到60m2/g左右,。
4,、官能基團(tuán)
一般認(rèn)為DNA提取生物磁珠表面官能團(tuán)能越密集,對(duì)DNA的吸附效果越好,,但考慮到空間位阻,、電荷斥力,過高濃度使官能團(tuán)陷入生物磁珠內(nèi)部等原因,,DNA提取生物磁珠的表面官能團(tuán)數(shù)量并不是越多越好的,。適當(dāng)?shù)慕档蜕锎胖樯a(chǎn)過程中官能團(tuán)修飾原料,可以很好的控制DNA提取生物磁珠的粒徑和吸附量平衡,。
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